[发明专利]一种中华绒螯蟹肝胰腺细胞分离及原代培养方法有效
| 申请号： | 201611168338.3 | 申请日： | 2016-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN106635956B | 公开（公告）日： | 2020-04-28 |
| 发明（设计）人： | 洪宇航;杨筱珍;成永旭;黄毅 | 申请（专利权）人： | 西昌学院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 周春洪 |
| 地址： | 615000 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 中华 绒螯蟹肝 胰腺 细胞 分离 培养 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种中华绒螯蟹肝胰腺细胞分离及原代培养方法，其特征在于，具体方法如下：
(1)取中华绒螯蟹胰腺组织用细胞分离液清洗4-5次，用剪刀剪碎至1mm2组织块，再用吸管吸取适量的组织块至装有5ml分离液的离心管中，用吸管吹打50次，200目细胞筛过滤至培养皿中，滤液移至干净离心管中1200r/min离心4min，得黄色沉淀，所述细胞分离液为D-Hanks液；
(2)取黄色沉淀，加入含100UI/ml青霉素和100μg/ml链霉素的2×L-15培养基中，吹打均匀后接种至96孔板中，将培养板放置于CO2细胞培养箱中，培养箱保持恒温28℃，5％CO2；
所述培养基为GIBCO公司的L-15培养基；所述2×L-15培养基制备方法如下：取1L规格L-15干粉溶解于500ml蒸馏水中，在无菌环境下0.22μm滤膜过滤除菌。
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