[发明专利]一种薄荷属植物盾状腺毛的计数方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种薄荷属植物盾状腺毛的简易计数方法。

背景技术

植物表皮毛是植物在长期进化过程中对生态环境适应的产物，对植物适应外界生物和非生物胁迫具有重要作用。植物表皮毛分为非腺毛和腺毛，其中腺毛是植物合成、储存或分泌大量次生代谢产物的场所。

薄荷（Mentha haplocalyx Briq.）为唇形科薄荷属多年生草本植物，全草入药，用于治疗风温初起、头痛、目赤、喉痹、咽喉肿痛、口舌生疮、牙痛、荨麻疹、风疹等等，其茎、叶中所含的挥发油被广泛地应用于食品、医药、化妆品、香料、烟草等工业。中国是世界公认的薄荷主产国，但长年栽培的很多品种都出现了严重退化，鲜草和薄荷油产量下降的情况。薄荷属植物叶片和茎表面腺毛分泌细胞是该属植物挥发油合成的场所。处于分泌时期的腺毛数量直接决定了此类以挥发油分泌为特殊性状表现植物的经济产量。表皮腺毛的数量会受环境因素及外界激素的影响，例如植物激素赤霉素(GA3)和茉莉酸（JA）能增加表皮腺毛的数量和密度。因此增加腺毛数量以提高挥发油产量为目的各种育种研究中必然涉及对盾状腺毛的计数观察。

传统观察盾状腺毛的方法为撕取上、下表皮水装片后显微观察，此方法建立在完整撕取植物上下表皮的基础上，该方法操作困难，费时费力，很多植物上下表皮难以撕取，并且即使撕取也只是叶片局部区域，和整个叶片腺毛分布的实际情况存在误差。还有利用扫描电镜直接扫描叶片表面来进行计数的方法，该方法计数准确，但需要昂贵的仪器和复杂的前处理。无法满足常规实验室的需要。因此急需一种简单实用，快速，经济，准确的技术方法。

发明内容

本发明针对传统现有技术的不足之处，提供了一种薄荷属植物盾状腺毛的计数方法。为该植物针对表皮腺毛数量改良的育种方法提供技术支持。

为了达到上述目的，本发明提供了一种薄荷属植物盾状腺毛的计数方法，包括如下步骤：

（1）叶片组织准备：

选取当年生植株需要进行观察的叶片作为实验材料，先用自来水冲洗干净后，再用装有蒸馏水的洗瓶仔细冲洗表面2-3次。吸干表面后备用；

（2）胶带粘取腺毛：取步骤（1）中准备好的叶片剪去中脉，将需要计数的远轴面或近轴面平放于透明胶带上，轻轻固定后顺同一方向按压2-3次，用镊子轻轻撕下叶片。

（3）染色：将印迹有完整叶片盾状腺毛的透明胶带剪下后用苏丹Ш染色10 min后酒精脱色2-3min。

（4）制片和显微观察：将脱色后的透明胶带粘有腺毛的一面覆盖于载玻片上后，用吸水纸吸去边缘试剂，进行普通光学显微镜观察计数。

本发明一种薄荷属植物盾状腺毛的计数方法具有以下优点：

1、以胶带直接印迹叶片表皮盾状腺毛的方法，相比撕取表皮制作水装片以及扫描电镜等方法，本发明方法简单易行，快速经济。由于盾状腺毛中所含次生代谢化合物粘在胶带上可被苏丹Ш染色，因此该方法同时具有良好的观察效果。

附图说明：

图1 薄荷叶片盾状腺毛透明胶带印迹图

具体实施方式

实施例 1、薄荷叶片盾状腺毛透明胶带印记盾状腺毛计数方法：

1、叶片组织准备：

选取当年生薄荷属植物薄荷第1、2节上叶片，先用自来水冲洗干净后，再用装有蒸馏水的洗瓶仔细冲洗表面2-3次。吸干表面后备用；

2、胶带粘取腺毛：将准备好的叶片剪去中脉，下表皮平放于透明胶带上，轻轻固定后顺同一方向按压2-3次，用镊子轻轻撕下叶片；

3、染色：将印迹有完整叶片盾状腺毛的透明胶带减下后用苏丹染色10min后酒精脱色2-3min。

4、制片和显微观察：将脱色后的透明胶带粘有腺毛的一面覆盖于载玻片上后进行普。