[发明专利]高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型及其构建方法

说明书

技术领域

本发明属于临床医学技术领域，尤其涉及一种高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型及其构建方法。

背景技术

大量研究表明，凋亡(即程序性死亡)参与多种原因导致的神经系统损害病理过程，如脑缺血、缺氧性损害等。氨中毒学说在肝性脑病的发病机制中占重要地位，氨对中枢神经系统的毒性作用主要是通过干扰脑的能量代谢实现，且课题组前期工作证实其导致一定程度的认知功能的障碍。但目前已有的研究集中在氨对大脑代谢及功能影响方面，而关于氨对大脑内神经元细胞凋亡的影响鲜有报道，Bcl-2和Bax是传统的凋亡相关因子，在其他脑病方面的研究较多，已有大量实验证实，Bcl-2和Bax在一些病理状态下如缺血、缺氧时神经元细胞凋亡过程中起重要作用。由于关于氨中毒时脑组织细胞凋亡的研究较少，因此针对该模型的这两个凋亡相关因子的研究可以完善氨中毒时脑组织细胞凋亡相关理论，为后续的治疗方面提供理论支持。

综上所述，目前已有的研究集中在氨对大脑代谢及功能影响方面，而关于氨对大脑内神经元细胞凋亡的影响属于技术空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型及其构建方法，旨在解决目前已有的研究集中在氨对大脑代谢及功能影响方面，而关于氨对大脑内神经元细胞凋亡的影响属于技术空白的问题。

本发明是这样实现的，一种高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型，所述高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型为：40只雄性SD大鼠，随机分为两组，每组20只：正常对照组，高血氨模型组；水迷宫试验评价大鼠学习记忆功能，大鼠麻醉后，分离血浆检测血氨，大鼠脑组织一部分4％多聚甲醛固定，一部分-80℃保存；Tunel试剂盒检测大鼠脑组织凋亡情况；RT-qPCR检测大鼠脑组织Bcl-2、Bax基因的表达。

本发明的另一目的在于提供一种所述高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型的构建方法，所述高血氨影响大鼠脑内凋亡基因表达的模型的构建方法包括以下步骤：

步骤一，40只实验动物按照随机原则分为2组：A组，正常对照组；B组，高血氨模型组，每组20只；B组：每只大鼠腹腔内注射5％氯化铵，剂量为0.5ml/100g，每周前4天每天1次。A组：作为对照，腹腔内注射生理盐水0.5ml/100g；实验动物给药四周建立高血氨模型；

步骤二，第五实验周开始水迷宫实验，实验前后均称量体重；每天上、下午两段固定时间进行水迷宫实验，一共5天；

步骤三，将大鼠面向水池壁，从4个象限固定的入水点按顺序分别放入池中，之后立即采用遮光帘和间接光源，摄像头及视频图像采集系统可自动记录大鼠寻找平台过程中的游泳轨迹及时间；

步骤四，水迷宫实验结束后，经腹腔注射10％水合氯醛麻醉大鼠，下腔静脉采到的血标本放入肝素抗凝试管颠倒几次，迅速置入冰浴；脑组织分离皮层与海马组织，一部分置入4％多聚甲醛溶液。一部分超低温冰箱保存；

步骤五，经肝素抗凝的大鼠全血置入加盖EP管低温3500rpm离心5min，分离得血浆，强生VITRO S350生化分析仪检测血氨。

进一步，当大鼠爬上平台时，水迷宫视频分析系统能够立即计算出Time值和distance值；每次大鼠到达平台后，让其在平台上停留30秒；如果在训练中大鼠超过120s不能找到平台，引导至平台，并停留30秒钟；将水迷宫实验的最后一次训练的学习记忆参数作为水迷宫的最终结果。

进一步，高血氨模型大鼠脑组织神经元凋亡增加，由于脑组织内多因子作用的结果，Bcl-2、Bax凋亡基因表达平衡失调所致为重要机制。