[发明专利]一种检测马杜霉素的化学发光酶联免疫分析法

说明书

本发明公开了一种马杜霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即马杜霉素类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：马杜霉素类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、马杜霉素类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测肌肉组织（鸡肉、猪肉、鱼肉等）中的马杜霉素含量。

技术领域

本发明涉及一种酶联免疫检测试剂盒，尤其涉及一种马杜霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

马杜霉素 英文名称Maduramicin,又名马度米星.是一种较新型的聚醚类一价单糖苷离子载体抗生素，本品抗球虫谱广对子孢子和第一代裂殖体均有抗球虫活性。本品能有效控制6种常见的鸡球虫，对鸭球虫病也有良好的预防效果。混饲，每1000 kg饲料5～10g马杜霉素由美国氰胺公司于20世纪80年代开发，1992年我国开发成功并大批量生产，由于价格较低，对球虫病具有良好的预防和治疗作用，使马杜霉素在临床得到广泛的应用。但该药毒性较大，安全范围窄，使用剂量非常接近鸡的中毒量，超量使用易引起禽中毒。家禽马杜霉素中毒一般为急性过程。急性死亡（1～ 2 d 内死亡）的动物一般会出现典型的中毒症状：东走西窜、站立不安、兴奋亢进等神经症状，或水样腹泻、腿软、行走及站立不稳。严重者两腿麻痹，昏睡直至死亡。亚慢性中毒表现为减食甚至食欲废绝，迅速消瘦，粪便呈现色泽变化，从青灰、浅绿、绿色至胆绿色，出现率约 20% 左右。家禽精神不振、蹲伏驱赶不动，甚至两脚瘫痪、驱赶时跗关节着地，两翅拍动、无力站立，甚至死亡。 在临床应用时常因使用不当，造成家禽中毒，经济损失较大。Ft%HWGE

目前，检测马杜霉素的方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。薄层色谱法的缺陷是：操作过程复杂，时间长；操作人员需要经过专业培训；影响分析的干扰因素较多，结果重复性差。放射免疫法，高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时，费力，不易普及，检测费用高，特别是放射免疫法还需要配备放射源，有一定危险性。鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测肌肉组织中马杜霉素含量的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种马杜霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。

本发明所述马杜霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的马杜霉素系列标准溶液、酶标羊抗兔抗体、马杜霉素抗体、发光溶液、洗涤溶液、包被溶液及封闭溶液；其特征在于：

所述酶标板的各孔包被有以马杜霉素与卵清蛋白偶合制成的包被抗原，其中包被抗原浓度优选10μg/mL。

所述卵清蛋白的分子量范围优选6.7KDa~6.8KDa。

所述马杜霉素系列标准溶液分别是0mg/kg，0.1mg/kg，0.3mg/kg，0.9mg/kg，2.7mg/kg和8.1mg/kg所述酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液，其工作浓度优选为1:1000。

所述马杜霉素抗体是由马杜霉素与分子量范围是6.7KDa~6.8KDa的牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的多克隆抗体，其工作浓度优选为1:1000。

所述发光液是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH＝8.8)和3/10000(体积比)H₂O₂的混合液。所述鲁米诺为发光底物，对甲苯酚为发光增强剂。

所述洗涤溶液是含有体积分数0.05％吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液。