[发明专利]间歇浸没式荔浦芋组培苗快速增殖的方法及荔浦芋种苗

权利要求书

1.间歇浸没式荔浦芋组培苗快速增殖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）建立间歇浸没液体培养系统：分别配置继代增殖液体培养基和生根液体培养基，并将所配置的培养基和间歇浸没式生物反应器灭菌后备用；

所述间歇浸没式生物反应器的主要结构包括：培养瓶、储液瓶、蠕动泵，储液瓶通过硅胶软管与培养瓶连接，通过蠕动泵的作用将液体培养基从储液瓶抽到培养瓶，再从培养瓶抽回储液瓶；所述培养瓶包括容器主体以及密封盖体，所述密封盖体顶部设有两个软管通孔，所述培养瓶和储液瓶为容积3L，储液瓶中液体培养基体积为1L；

所述继代增殖液体培养基为添加有6-BA、NAA、PP₃₃₃以及白砂糖的基础MS培养基；

其中，6-BA的浓度为4mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L，PP₃₃₃的浓度为0.2mg/L,白砂糖的浓度为30g/L；

所述生根液体培养基为添加有NAA、IBA、PP₃₃₃以及白砂糖的基础MS培养基；

其中NAA的浓度为0.3mg/L，IBA的浓度为0.4mg/L，PP₃₃₃的浓度为0.4mg/L,白砂糖的浓度为30g/L；

（2）接种与继代增殖培养：制备荔浦芋外植体，并将荔浦芋外植体接种于间歇浸没式生物反应器中，并在继代增殖液体培养基中进行继代增殖培养；

其中，荔浦芋外植体制备方法如下：取荔浦芋茎尖分生组织培养的第4代组培苗，并将诱导出的不定芽切为单芽或双芽，剥离老叶，并保留芽体1～2cm，即得；

荔浦芋外植体的接种密度为：每升培养液中接种10～15株外植体；

继代培养条件为：温度28±1℃，光照1500Lx，12小时光照，12小时黑暗，设定间歇浸没式生物反应器的相关参数，即间歇培养的间歇频率为每4小时一次，培养时间为5分钟，培养时间30天；

（3）生根培养：继代增殖培养结束后，将间歇浸没式生物反应器中的培养基替换为生根液体培养基，并继续进行生根培养；

生根培养条件为：温度28±1℃，光照1500Lx，14小时光照，10小时黑暗，设定间歇浸没式生物反应器的相关参数，即间歇培养的间歇频率为每6小时一次，培养时间为3分钟，培养时间20天；

（4）生根苗移栽：生根培养结束后，将所得组培生根苗移栽至培养杯中育苗，并将所得种苗移栽至田地。