[发明专利]一种重组白细胞介素18及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种重组白细胞介素18及其制备方法与应用。本发明提供的rhIL‑18在其N端第10位由丝氨酸突变为可羟基化的氨基酸残基，以如SEQ ID NO:1所示的hrIL‑18进行实验，其解决了野生型IL‑18溶解度低、稳定性差、生物活性低等缺点，而且如SEQ ID NO:1所示的hrIL‑18更易纯化，适合工业化生产。本发明提供的rhIL‑18能够抑制人内皮细胞微管的产生，且能够促进NK细胞的活性、促进IFN‑γ的形成；而对于人视网膜色素上皮细胞的活性不会产生影响，说明该rhIL‑18能够作为治疗眼底新生血管性疾病和/或恶性肿瘤的药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种重组白细胞介素18及其制备方法与应用。

背景技术

黄斑区视网膜后有异常的新生血管生长称为湿性老年性黄斑变性(AMD)；糖尿病性微血管病变中的特异性眼底病变，例如视网膜新生血管，称为糖尿病视网膜病变(DR)。2013年全球糖尿病视网膜病变(DR)患者9300万，其中增殖性DR(PDR)患者1700万，糖尿病性黄斑水肿患者2100万，威胁视力的DR患者2800万。糖尿病发病5年后糖尿病视网膜病变发生率为25％，10年后增至60％，15年后可高达75％～80％。如此可见，加快研制新型治疗眼底血管病变制剂，不仅具有社会效益，而且将会产生巨大的经济效益。

目前，对于AMD或DR缺乏理想的治疗措施，临床上主要采用对症治疗或辅助性治疗方法来控制或延缓疾病的发展，常用的治疗方法如下：降糖药物、抗炎药物、局部使用TNF-α拮抗剂、菲诺贝特、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、RAS系统抑制剂、非酶糖基化抑制剂、综合疗法和激光治疗。抗-VEGF治疗涉及到定期眼内注射抗-VEGF单抗(如Lucentis),不仅具有一定的伤害性，而且价格昂贵且只针对确诊病例，此外，尽管发生率很低，但每次注射均会带来眼内感染、视网膜出血和剥离的严重风险，而且这个治疗没有终点。

1995年IL-18作为IFNγ诱导因子被报道，随后证明给小鼠全身注射IL-18(50μg/kg)6天，对FGF诱导的角膜毛细血管生成具有抑制作用。也有报道表明IL-18对氧诱导的小鼠视网膜病变模型的视网膜病理性新生血管的生成具有调控作用。Doyle等最近报道，眼内或全身注射鼠源性的IL-18(SB-528775)可以防止实验诱导的CNV。因此IL-18的单独使用或为了降低抗新生血管药物眼内注射频率而与其合用都是可行的。此外该作者还证明鼠源性和人源性的重组IL-18对视网膜色素上皮细胞(RPE)都是非常安全的，RPE细胞是AMD中功能异常的关键细胞。Shen J.等证明房水中IL-18含量高的患者在接受Lucentis单抗治疗黄斑水肿及视网膜静脉栓塞时将显著改善视觉效果，他们同时证明VEGF以相互抑制的方式调控IL-18含量，并用多个视网膜/CNV模型证明重组IL-18能够调节病理模型的眼底渗出，他们提出IL-18可能成为调控眼睛病理性新生血管生成的新方法，这一结果与上述Doyle等报道一致。

2006年重组人IL-18(商品名：Iboktadekin)作为抗肿瘤制剂进入临床试验阶段，由GlaxoSmithKline公司研发。已有多篇文章报道了IL-18人体试验是安全的，而且未见有关眼部副作用的报道。此外，已经报道给啮齿类全身注射IL-18，在视网膜可检出较高含量的IL-18，这一结果提示IL-18在视网膜中的生物可用性。病人使用IL-18可能引起1～2级的短暂发热，但能快速缓解。用高达2000μg/kg剂量，病人的眼部也没出现明显副作用。综上所述重组IL-18在眼科学中的研究结果表明IL-18对眼部病理性新生血管性疾病可能具有应用价值。既然目前已证明IL-18临床试验试是安全的，那么IL-18就可用于CNV和湿性AMD的辅助治疗研究，它能否成为有效的药物，值得进一步深入研究。

目前，重组人IL-18的制备主要采用生物工程的方式，但由于IL-18序列的结构的特殊性，其在生物合成的过程中不易纯化，且合成后活性很低。因此，纯度低、复性率低和产量低等一些问题，导致了IL-18的制备成本增高，进而导致价格昂贵。

发明内容