[发明专利]无血清无蛋白细胞培养基

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体来说是无血清无蛋白细胞培养基；本发明的目的是提供一种支持细胞高细胞密度生长的无血清无蛋白成分界定的培养基，其具体技术方案包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其它化学物，聚胺或者其衍生物,水解物；本发明无血清无蛋白细胞培养基制作成本低廉，稳定性高，活细胞密度和细胞存活率极高，适用于用于重组蛋白和疫苗生产的细胞。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说是无血清无蛋白细胞培养基。

背景技术

动物细胞已被广泛用于重组蛋白药物和疫苗的生产，培养基是动物细胞大规模培养的关键技术。用传统的培养基培养细胞，需要在传统培养基中加入5-10％的血清。血清价格昂贵，容易被病毒和支原体感染，每批次间的质量不稳定，血清中含有大量的蛋白质，给重组蛋白细胞产品的分离纯化带来很大的困难。为了克服以上难题，科学家们对血清中各成分在细胞培养中的作用的研究发现，血清中的胰岛素，转铁蛋白和其他生长因子是促进细胞生长的主要成分，研发出用胰岛素、转铁蛋白和其他生长因子替代血清的无血清培养基。由于这些生长因子主要是从血清中提取或者是用基因重组技术生产的，价格昂贵，每批次间的质量也不稳定，大大地限制了此类无血清培养基的大规模生产应用。无血清无蛋白培养基可以避免使用动物源的成分，降低生产成本，简化下游分离纯化的步骤，避免外源传染性海绵状脑病，外源病毒和外源支原体的污染，实现大规模的生产应用。目前我国也研发出一些无血清无蛋白培养基，但这些培养基只能支持低细胞密度的细胞生长，重组蛋白的表达也比较低，研发支持高细胞密度生长和高重组蛋白表达的无血清无蛋白培养基是目前培养基研究领域中的一项重要课题。

发明内容

本发明的目的是提供一种支持细胞高细胞密度生长的无血清无蛋白成分界定的培养基；一种支持细胞高细胞密度生长和高重组蛋白表达的无血清无蛋白培养基。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：无血清无蛋白细胞培养基，包括氨基酸，维生素，无机盐和微量元素，碳水化合物和其它化学物的成分，还包括聚胺或者其衍生物，所述微量元素尤其包含锌盐和螯合铁，所述锌盐为以下3种锌盐中的任何一种或几种：I.盐酸锌(ZnCl2)，II.硫酸锌(ZnSO4-7H2O)，III.硝酸锌[Zn(NO3)2-6H2O]，其在每升培养基中的含量分别如下:

ZnCl2 1–100μM

ZnSO4-7H2O 1–100μM

Zn(NO3)2-6H2O 1–100μM，

所述螯合铁为以下3种螯合铁中的任何一种或几种：I.柠檬酸铁铵(Ferricammonium citrate or Ammonium iron(III)citrate)，II.柠檬酸铁(Ferric citrate oriron(III)citrate)，III.乙二胺四乙酸铁钠盐(Ethylenediaminetetraacetic acid Iron(III)sodium salt)，其在每升培养基中的含量分别如下：

柠檬酸铁铵 1–500mg/L

柠檬酸铁 1–500μM

乙二胺四乙酸铁钠盐 1–500μM，

所述聚胺或者其衍生物包括以下7种聚胺或者其衍生物中的一种或几种：I.L-鸟氨酸(L-Ornithine)或者其衍生物，II.腐胺(Putrescine)或者其衍生物，III.亚精胺(Spermidine)或者其衍生物，IV.精胺(Spermine)或者其衍生物，V.尸胺(Cadaverine)或者其衍生物，Ⅵ.胍基丁胺(Agmatine)或者其衍生物,Ⅶ.L-瓜氨酸(L-Citrulline)或者其衍生物，其在每升培养基中的含量分别如下：