[发明专利]一种益生菌及其制备方法有效
申请号: | 201611146623.5 | 申请日: | 2016-12-13 |
公开(公告)号: | CN107043714B | 公开(公告)日: | 2021-03-12 |
发明(设计)人: | 彭永正;伍菲凡;郭先凤;易江丰 | 申请(专利权)人: | 广州康泽医疗科技有限公司;南方医科大学珠江医院 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12R1/01 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人: | 张春水;唐京桥 |
地址: | 510630 广东省广州*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 益生菌 及其 制备 方法 | ||
1.一种益生菌,其特征在于,所述益生菌的保藏编号为:GDMCC60085。
2.一种如权利要求1所述益生菌的制备方法,其特征在于,所述制备方法为:
步骤一、配置菌液:粪便与生理盐水混匀后稀释得稀释液,所述稀释液接种于粘蛋白液体培养基中,培养后得菌液;
步骤二、PCR扩增:以所述菌液为模板,使用针对Akkermansia属的引物进行PCR,挑选PCR反应阳性管中的菌液接种于粘蛋白固体培养基上,培养后得菌落;
步骤三、培养纯化菌落。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述稀释液中粪便浓度为10-6g/ml,所述稀释液和所述粘蛋白液体培养基的体积比为1:9。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤一中所述培养的条件为:37℃厌氧培养,步骤一中所述培养的时间为4天。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述针对Akkermansia属的引物包括:引物一和引物二;
所述引物一的序列为CAGCACGTGAAGGTGGGGAC,所述引物二的序列为CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤二中所述培养的条件为:37℃厌氧培养,步骤一中所述培养的时间为4天。
7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述培养纯化菌落得方法为:所述菌落接种于巧克力平板上培养后,将巧克力平板上的菌落接种于哥伦比亚血平板上进行纯化培养出菌落。
8.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括:测序验证,所述测序验证方法在所述培养纯化菌落步骤后进行。
9.一种益生菌固态曲,其特征在于,所述益生菌固态曲由权利要求1所述的益生菌制得。
10.根据权利要求9所述的益生菌固态曲,其特征在于,所述益生菌固态曲中,所述益生菌的活菌数量为109cfu/g曲。
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