[发明专利]沟叶结缕草中一个耐盐基因ZmGnTL及其表达载体和应用有效
| 申请号： | 201611144441.4 | 申请日： | 2016-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN106754996B | 公开（公告）日： | 2020-04-07 |
| 发明（设计）人： | 陈煜;宗俊勤;刘建秀;陈静波;汪毅;李丹丹 | 申请（专利权）人： | 江苏省中国科学院植物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/20 |
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| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 沟叶结缕草中 一个 基因 zmgntl 及其 表达 载体 应用 | ||
1.沟叶结缕草耐盐基因ZmGnTL，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO.1。
2.含有权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmGnTL的植物表达载体，其特征在于，所述的植物表达载体为BamH I和Not I双酶切权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmGnTL后插入到gateway入门载体pENTR1A，经线性化后与pEarleyGate103表达载体质粒进行重组反应得到。
3.权利要求2所述的含有权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmGnTL的植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：（1）ZmGnTL基因全长编码区的获得：设计引物ZmGnTL-F：SEQ ID NO.2和ZmGnTL-R：SEQ ID NO.3，以沟叶结缕草cDNA为模板进行PCR反应，PCR产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒并测序获得ZmGnTL全长序列SEQ ID NO.1；（2）pENTR1A-ZmGnTL质粒构建：设计引物ZmGnTL-BamH I-F：SEQ ID NO.4和ZmGnTL-Not I-R：SEQ ID NO.5，PCR扩增获得在上游和下游分别引入BamH I和Not I酶切位点的ZmGnTL基因，PCR产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒pMD19-T Simple-ZmGnTL；BamH I和Not I分别对阳性质粒pMD19-TSimple-ZmGnTL和pENTR1A进行双酶切，取酶切后的ZmGnTL片段与BamH I和Not I双酶切的pENTR1A连接，连接产物转化TOP10感受态细胞；37℃过夜培养，挑取阳性单克隆扩大培养，提取质粒pENTR1A-ZmGnTL；（3）提取的阳性质粒pENTR1A-ZmGnTL经Pvu I单酶切线性化后与pEarleyGate103载体质粒进行LR重组反应，转化，提取阳性质粒，电泳检测并测序验证为SEQ ID NO.1，植物表达载体pEarleyGate103-ZmGnTL构建成功。
4.权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmGnTL在创建耐盐新种质中的应用。
5.权利要求2所述的植物表达载体在创建耐盐新种质中的应用。
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