[发明专利]一个新的植物耐盐基因ZmDUF1644及其表达载体和应用

权利要求书

1.沟叶结缕草耐盐基因ZmDUF1644，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO. 1。

2.含有权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmDUF1644的植物表达载体，其特征在于由权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmDUF1644与植物表达载体构成。

3.根据权利要求2所述的含有权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmDUF1644的植物表达载体，其特征在于所述的植物表达载体为BamHI和Not I双酶切ZmDUF1644后插入到gateway入门载体pENTR1A，经线性化后与pEarleyGate103表达载体质粒进行重组反应得到。

4.权利要求3所述的含有权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmDUF1644的植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）ZmDUF1644基因全长编码区的获得：设计引物ZmDUF1644-F: SEQ ID NO.2和ZmDUF1644-R: SEQ ID NO.3，以沟叶结缕草cDNA为模板进行PCR反应，PCR产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒并测序获得ZmDUF1644全长序列SEQ ID NO. 1；

（2）pENTR1A-ZmDUF1644质粒构建：设计引物ZmDUF1644-BamH I-F: SEQ ID NO.4和ZmDUF1644-Not I-R: SEQ ID NO.5，PCR扩增获得在上游和下游分别引入BamHI和Not I酶切位点的ZmDUF1644基因，PCR产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒pMD19-T Simple-ZmDUF1644； BamH I和Not I分别对阳性质粒pMD19-TSimple-ZmDUF1644和pENTR1A进行双酶切，取酶切后的ZmDUF1644片段与BamHI和Not I双酶切的pENTR1A连接，连接产物转化TOP10感受态细胞；37 ℃过夜培养，挑取阳性单克隆扩大培养，提取质粒pENTR1A-ZmDUF1644；

（3）提取的阳性质粒pENTR1A-ZmDUF1644经PvuI单酶切线性化后与pEarleyGate103载体质粒进行LR重组反应，转化，提取阳性质粒，电泳检测并测序验证为SEQ ID NO. 1，植物表达载体pEarleyGate103-ZmDUF1644构建成功。

5.权利要求1所述的沟叶结缕草耐盐基因ZmDUF1644在创建耐盐新种质中的应用。

6.权利要求2所述的植物表达载体在创建耐盐新种质中的应用。