[发明专利]一种检测福莫特罗胶体金免疫层析试纸条及制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测福莫特罗的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与应用，其特别适于动物组织中福莫特罗残留的检测，属于免疫学技术领域和兽药残留分析技术领域。

背景技术

福莫特罗(Formoterol)是由日本山之内制药株式会社中央研究所开发的第三代β2-肾上腺素受体激动剂平喘药物，具有支气管扩张作用，还有抗过敏和抑制水肿的作用，可用于治疗慢性支气管哮喘、夜间哮喘、运动性哮喘、慢性阻塞性肺病以及儿童非哮喘性呼吸道疾病。近年来，随着我国对食品安全监管力度的加强，对违禁使用兽药的监管力度逐渐加大，滥用违禁兽药的现象有所控制，但是出现了使用生物活性相似的替代品代替重点监管兽药的新现象。新型“瘦肉精”福莫特罗与克伦特罗等三种常用“瘦肉精”物质具有同样的促进生长、增加瘦肉率的作用，2002年农业部1519号条例规定食品动物禁止使用β激动剂类药物作为饲料添加剂。福莫特罗检测手段滞后，尤其是快速检测产品缺乏，国家及各省市正在加紧建立新型“瘦肉精”物质的确证方法，同时也急需适合批量、快速筛选的检测产品，满足政府和企业的需要。

目前有关福莫特罗残留的检测技术主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)及免疫分析技术，前三种方法灵敏、准确，但操作繁琐，对实验设备和技术要求较高，不适合大批量样品的快速检测。免疫分析方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA)，具有灵敏度高、特异性好、成本低、操作方便等特点，适于大批量样品筛选。GICA作为一种新的免疫学检测方法，既有免疫学方法的特异性，又有简便快速、不需仪器的特点，其在医学、动植物检疫、食品检测等多领域已得到了广泛应用。开发福莫特罗胶体金试纸条有助于福莫特罗残留快速、准确的检测，有效遏制其在水产品中的违规使用及残留超标问题，提高人民群众水产品餐桌质量安全水平。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术缺陷提供一种检测福莫特罗的胶体金免疫层析试纸条，该胶体金免疫层析试纸条具有操作简单，快速，适合大批量样品初筛的优点。此外，本发明进一步提供该检测福莫特罗的胶体金免疫层析试纸条的制备方法与应用。

本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。

一种检测福莫特罗的胶体金免疫层析试纸条，该检测试纸条由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，试纸两端设有保护膜，所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫依次粘贴于底板上；其中胶体金垫为吸附有胶体金标记的福莫特罗单克隆抗体，包被膜上含有用福莫特罗偶联载体蛋白的预包被检测线(T线)，用羊抗或兔抗小鼠IgG溶液预包被的质控线(C线)，两条线竖直平行排列。

上述胶体金免疫层析试纸条，福莫特罗单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，由CCTCC NO:C2016182的杂交瘤细胞株Formoterol-3E6产生。该杂交瘤细胞株被命名为杂交瘤细胞株Formoterol-3E6，于2016年10月26日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2016182。

上述胶体金免疫层析试纸条，所述福莫特罗单克隆抗体由福莫特罗抗原产生，其为由福莫特罗与载体蛋白采用碳二亚胺法合成的偶联物，包括免疫原与检测原；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清白蛋白、免疫血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白；免疫原优选载体为牛血清白蛋白，检测原优选载体为卵清蛋白；

上述胶体金免疫层析试纸条，所述底板为PVC条或其它不吸水的硬质材料；所述样品垫和胶体金垫由玻璃纤维棉制成；所述吸水垫由吸水滤纸制成；所述包被膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为不透明的胶膜。

本发明所述的胶体金层析试纸条制备方法，包括如下步骤：

(1)制备福莫特罗抗原工作液：

(a)活化对氨基苯甲酸的制备：称取6mg亚硝酸钠，溶在0.35mL蒸馏水中，然后称取10mg对氨基苯甲酸，溶入1.1mL 1mol/L的盐酸中，冰浴搅拌，将上述亚硝酸钠溶液逐滴加入到对氨基苯甲酸溶液中，避光反应1h，得到活化对氨基苯甲酸；

(b)带有羧基的福莫特罗活性中间体的制备：称取福莫特罗30mg溶在5mL、0.05mol/L冰冷的硼砂缓冲溶液中(pH＝9，含0.15mol/L的氯化钠)，冰浴搅拌，将此溶液逐滴加入到活化对氨基苯甲酸溶液中，4℃避光反应3h，得到带有羧基的福莫特罗活性中间体溶液；