[发明专利]一种检测沙拉沙星的化学发光酶联免疫分析法

说明书

本发明公开了一种沙拉沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即沙拉沙星类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：沙拉沙星类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、沙拉沙星类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测肌肉组织（鸡肉、猪肉、鱼肉等）中的沙拉沙星含量。

技术领域

本发明涉及一种酶联免疫检测试剂盒，尤其涉及一种沙拉沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

沙拉沙星是氟喹诺酮类抗生素，具有下列特性：由于独特的化学结构，使其成为兽医临床药物中十分重要的抗生素。沙拉沙星对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和支原体类病原菌均具有广谱抗菌活性，在一定的浓度下对细菌支原体也具有杀菌作用，还能杀死对抗生素具有抗药力的细菌，例如抗p一乳酸菌素、氨基糖昔等。沙拉沙星因其具有独特的作用，自80年代开始就被广泛的应用于动物和鱼虾类的疾病的预防和治疗。但最近的研究发现，凡使用过沙拉沙星的动物，在一定时期内其产品都有残留，因其具有神经毒性和肾脏毒性，所以在动物食品中残留会对人类健康造成威胁和影响，欧美国家及我国均要求对其限量使用。2002年12月我国农业部公告第235号文规定在所有食品动物的肌肉、脂肪中最高残留限量为100 μg /kg，在所有食品动物的肝、肾中最高残留限量为200 μg/kg。因此，沙拉沙星己经列为兽药残留监控的重点。检测沙拉沙星残留量的化学方法主要有薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气一质联机(GC/MS)、液一质联机(HPLC/MS)、毛细管电泳(CE)等，由于复杂的仪器设各和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。

免疫分析技术以其抗原抗体反应的高度专一性，以及测定方法简单、快速、灵敏度高、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点，在农兽药残留分析中展示了广泛的应用前景。随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化，免疫学检测技术会成为食品农兽药残留和食品安全质量控制的有效快速检测手段。基于目前兽药残留诊断试剂的研究现状，及时开发出优于目前的、快速灵敏的检测试剂可谓是当务之急。虽然农兽药残留分析的方法虽然有很多，但是利用免疫学技术进行分析是特异性最好、检测时间最短的方法。

目前，检测沙拉沙星的方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。薄层色谱法的缺陷是：操作过程复杂，时间长；操作人员需要经过专业培训；影响分析的干扰因素较多，结果重复性差。放射免疫法，高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时，费力，不易普及，检测费用高，特别是放射免疫法还需要配备放射源，有一定危险性。鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测肌肉组织中沙拉沙星含量的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种沙拉沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。

本发明所述沙拉沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的沙拉沙星系列标准溶液、酶标羊抗兔抗体、沙拉沙星抗体、发光溶液、洗涤溶液、包被溶液及封闭溶液；其特征在于：

所述酶标板的各孔包被有以沙拉沙星与卵清蛋白偶合制成的包被抗原，其中包被抗原浓度优选10μg/mL。

所述卵清蛋白的分子量范围优选6.7KDa~6.8KDa。

所述沙拉沙星系列标准溶液分别是0mg/kg，0.1mg/kg，0.3mg/kg，0.9mg/kg，2.7mg/kg和8.1mg/kg所述酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液，其工作浓度优选为1:1000。