[发明专利]一种检测颗粒状角膜营养不良易感基因突变位点的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测颗粒状角膜营养不良易感基因突变位点的试剂盒。本发明的试剂盒包括引物对A、引物对B、引物对C以及序列7、序列8、序列9和序列10所示的延伸引物A1、延伸引物A2、延伸引物B和延伸引物C；引物对A由序列1的第11‑30位和序列2的第11‑30位所示的单链DNA组成，引物对B由序列3的第11‑30位和序列4的第11‑30位所示的单链DNA组成，引物对C由序列5的第11‑30位和序列6的第11‑30位所示的单链DNA组成。本发明的试剂盒可以检测rs121909208、rs121909209、rs121909211和rs121909215的核苷酸，也可用于辅助诊断颗粒状角膜营养不良。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，一种检测颗粒状角膜营养不良易感基因突变位点的试剂盒。

背景技术

遗传性颗粒状角膜营养不良(Granular Corneal Dystrophy，GCD)为一系列与家族遗传有关的原发性进行性角膜病变的总称。该病多数为常染色体显性遗传病,原发于角膜，很少伴随其他眼部病变或全身病变；起病大多在20岁以前；病程缓慢，病变区多无新生血管生长；开始只侵犯角膜的某一层，晚期可波及邻近层次，甚至影响全层角膜；药物治疗无效。

迄今为止，已报道的与GCD有关的基因共有12个，其中TGFβI(transforminggrowth factor beta induced)基因是诱导GCD的重要因素，其所对应的最常见的4个突变位点有：c.371GT/A(rs121909211)、c.1663CT(rs121909208)、c.1664GA(rs121909209)、c.1868GA(rs121909215)。根据突变位点及临床症状不同，通常将GCD分为3种型别，即GCDI型、GCDII型、GCDIII型。其中，GCDI型与突变位点c.371GT(rs121909211)和c.1663CT(rs121909208)相关，GCDII型与突变位点c.371GA(rs121909211相关，GCDIII型与c.1664GA(rs121909209)和c.1868GA(rs121909215相关。

近视多发生在青少年、学生、上班族等群体中，给患者生活、学习、工作带来诸多不便。为治疗近视多数患者(以青少年居多)会采取激光矫正术进行治疗。GCD则是屈光矫正手术的禁忌症，这主要是由于该病在20岁前一般不表现出明显的临床症状，而常用的检测手段——视敏度测试及裂隙灯检查很难发现，一旦贸然进行角膜屈光矫正手术便会刺激角膜基质层蛋白恶化，产生角膜颗粒状混浊，严重者导致失明。就目前的医疗技术水平而言，患者一旦发病只能通过角膜移植术治疗。给患者造成了极大的痛苦和生活上的不便。

因此，对于一些具有手术治疗诉求的患者而言，迫切需要一种无创、快捷、准确、便宜的检测方法，实现从基因水平判断角膜屈光手术的可行性；让适宜接受角膜屈光手术的人群放心地接受手术治疗，恢复视力，同时避免因漏检而导致的失明等严重后果。

目前针对rs121909211、rs121909208、rs121909209和rs121909215四个突变位点的检测方式主要为Sanger测序法和qPCR检测法。qPCR和Sanger测序方法每次反应只能检测单个位点，通量低。MassARRAY质谱基因分型系统虽然能够借助多重PCR技术实现多个位点同时在一个反应中的检测，但是对于这4个位点，由于位点所处区域的碱基序列存在高度相似性，导致多重PCR扩增引物的特异性差，容易出现假阳性，假阳性高，有关对上述4个位点的检测需要分别设定反应孔进行反应，检测时间长，成本较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测TGFβI基因中的SNP位点，尤其是rs121909208、rs121909209、rs121909211和rs121909215。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了用于检测TGFβI基因中SNP位点的成套引物。

本发明所提供的用于检测TGFβI基因中SNP位点的成套引物，包括名称为引物对A、引物对B和引物对C中的三种、任两种或任一种；