[发明专利]一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株及其液态发酵产酶方法

权利要求书

1.一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株，其特征在于：所述菌株具体为黑曲霉菌株(Aspergillus niger)QL-225，保藏编号为CGMCC No.13168。

2.如权利要求1所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株，其特征在于：所述黑曲霉菌株QL-225液态发酵所产β-果糖苷酶的最适作用pH为4.0-7.0，最适作用温度范围为40℃-60℃。

3.如权利要求1-2任一所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法，主要包括以下步骤：

斜面培养：取一环黑曲霉菌株QL-225接种于斜面培养基，30℃下恒温培养72h，得到一级种子；

摇瓶培养：挑取一环一级种子接入种子培养基中，恒温34℃，摇床转速200rpm条件下培养72h，得到二级种子液；

种子罐培养：将所述二级种子液按照接种量5％(v/v)接入种子罐培养基，恒温34℃、转速200-800rpm条件下培养48h，得到三级种子液；

发酵罐培养：将所述三级种子液按照接种量5％(v/v)接入发酵罐培养基，恒温34℃，转速200-800rpm，通风量设置为：发酵第0h至24h为0.25vvm、发酵第24h至48h为0.5vvm、发酵第48h至发酵结束为1.0vvm，通过向培养基中流加补料培养基，发酵全程控制pH4.5-5.5，发酵至酶活增长缓慢，菌体自溶严重时结束发酵，发酵周期为120-140h，得到最终发酵液；

将所述最终发酵液通过提取与精制方法，获得β-D-呋喃果糖苷酶成品酶制剂；

所述斜面培养基组成为：蔗糖25g，NaNO₃ 2g，MgSO₄ 0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄ 0.01g，K₂HPO₄ 1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 4.5，121℃灭菌20min。

4.如权利要求3所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法，其特征在于：所述斜面培养基：蔗糖25g，NaNO₃ 2g，MgSO₄ 0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄ 0.01g，K₂HPO₄ 1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 4.5，121℃灭菌20min；所述种子培养基：麦芽汁150mL，琼脂3g，pH 4.5，121℃灭菌20min；

所述种子罐培养基按质量分数组成：葡萄糖2％，酵母粉1.5％，KH₂PO₄ 0.15％，CaCl₂0.005％，蒸馏水配置，调节pH 4.5，121-123℃灭菌30-35min；

所述发酵罐培养基按质量分数组成：玉米淀粉4％，玉米粉4％，豆饼粉4％，硫酸铵1％，KH₂ PO₄ 0.3％，玉米浆0.6％，CaCl₂ 0.5％，蒸馏水配置，调节pH 4.5，121-123℃灭菌30-35min；

所述补料培养基按质量分数组成：玉米淀粉10％，硫酸铵1％，KH₂PO₄ 0.1％，玉米浆0.6％，CaCl₂ 0.5％，蒸馏水配置，调节pH 4.5，121-123℃灭菌30-35min。

5.如权利要求3所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法，其特征在于：所述β-D-呋喃果糖苷酶的提取与精制方法如下：

向所述最终发酵液中加入2-5％珍珠岩助滤剂，用板框80-200目、压力0.15-0.2MPa进行板框压滤，得到板框压滤液；

将所述板框压滤液用1％的20#硅藻土进行精滤1-3h，得到精滤酶液；

用5-20KD超滤膜对所述精滤酶液进行超滤浓缩，得到超滤浓缩液；

向所述超滤浓缩液中加入质量分数为：0.1～0.4％(m/v)稳定剂、5％～10％(m/v)防腐剂；之后用1％～3％的20#硅藻土进行过滤除菌，即得到β-D-呋喃果糖苷酶液体成品酶制剂。