[发明专利]尘螨变应原速崩型舌下片剂疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种尘螨变应原速崩型舌下片剂疫苗，其特征在于采用直接冻干法制片的尘螨变应原快速崩解舌下片剂，其中含有尘螨变应原和相应的赋形剂、矫味剂、色素等，其中尘螨变应原为户尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)变应原或粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)变应原或两者的混合尘螨变应原。

2.根据权利要求1所述尘螨变应原速崩型舌下片剂疫苗，其特征在于：户尘螨变应原的总生物活性为1～20000AU/片，粉尘螨变应原的总生物活性为1～20000AU/片，混合尘螨变应原原液的总生物活性为1～20000AU/片。

3.如权利要求1所述的舌下片疫苗，其特征在于：每片舌下片中，甘露醇的含量为0～100mg，阿司帕坦的含量为0～10mg，色素的含量为0～0.5mg，制备时采用的磷酸盐缓冲液的浓度为2mM～200mM。

4.如权利要求1所述的舌下片疫苗，其特征在于：将户尘螨变应原原液或粉尘螨变应原原液、或混合尘螨变应原原液用磷酸盐缓冲液稀配至所需浓度，加入甘露醇、阿司帕坦、色素，维持pH7.0-8.0，搅拌均匀，加入铝制泡罩板中直接入箱冻干制得。

5.根据权利要求2所述的户尘螨变应原原液，采用下述步骤制备：

1)通过机械震荡法收集户尘螨纯螨体，然后使用40～100目网筛除去杂质，并对所收集户尘螨螨体进行纯度检测，形态学与分子生物学鉴定。

2)将1)所得到的户尘螨螨体以体积比1:5加入无水乙醇，在室温间断搅拌下脱脂，每次3h,脱脂至上清无色，将脱脂后的固体物自然干燥至无乙醇味。

3)将脱脂后的户尘螨螨体1000g以投料比1:25(W:V)加入25000ml 200mM pH8.0磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，4℃搅拌24h。

4)将提取后的提取液，6000rpm、4℃离心15min，取上清8000rpm、4℃离心30min后取上清。

5)将提取结束后的提取液用8μm滤膜澄清过滤，再将粗提液经0.45μm、0.22μm滤膜依次过滤。

6)将5)过滤后的提取液，用5KD超滤膜衡滤，直到滤出液上清为无色或滤出液的电导与超滤用缓冲液一致，将提取液超滤浓缩到原体积1/5，用免疫荧光法测定原液活性不低于50000AU/ml。

6.根据权利要求2所述的粉尘螨变应原原液，采用下述步骤制备：

1)通过机械震荡法收集粉尘螨纯螨体，然后使用40～100目网筛除去杂质，并对所收集粉尘螨螨体进行纯度检测，形态学与分子生物学鉴定。

2)将1)所得到的粉尘螨螨体以体积比1:5加入无水乙醇，在室温间断搅拌下脱脂，每次3h,脱脂至上清无色，将脱脂后的固体物自然干燥至无乙醇味。

3)将脱脂后的户尘螨螨体1000g以投料比1:25(W:V)加入25000ml 200mM pH8.0磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，4℃搅拌24h。

4)将提取后的提取液，6000rpm、4℃离心15min，取上清8000rpm、4℃离心30min后取上清。

5)将提取结束后的提取液用8μm滤膜澄清过滤，再将粗提液经0.45μm、0.22μm滤膜依次过滤。

6)将5)过滤后的提取液，用5KD超滤膜衡滤至滤出液上清为无色或滤出液的电导与超滤用缓冲液一致，将提取液超滤浓缩到原体积1/5，用免疫荧光法测定原液活性不低于50000AU/ml。

7.根据权利要求2所述的混合尘螨变应原原液，采用下述步骤制备：

1)将权利要求2所述户尘螨变应原原液和粉尘螨变应原原液按1：5～5：1的比例混合。

2)将1)获得的混合原液用免疫荧光法测定原液活性，其活性不低于50000AU/ml。

8.根据权利要求4所述的舌下片疫苗，采用直接冻干法制得，其冻干参数如下：

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