[发明专利]一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法有效
| 申请号： | 201611123598.9 | 申请日： | 2016-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN106771189B | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 刘自立;马贵军;石海芳;俞爱敏;姬明放 | 申请（专利权）人： | 申联生物医药（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 郭国中 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 油佐剂疫苗 抗原 定量检测 破乳 定性 抗原样品 竞争剂 抗体 中和 标准曲线斜率 表面活性剂 检测灵敏度 竞争ELISA 纯化处理 间接竞争 结合位点 竞争抗原 抗原反应 固相化 合成肽 正丁醇 混匀 吸附 回收率 口蹄疫 疫苗 释放 检测 | ||
1.一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将口蹄疫合成肽疫苗破乳，将破乳后的抗原样品采用竞争ELISA方法进行定性定量检测；
所述破乳方法为：将油佐剂疫苗与正丁醇混合，然后加入竞争剂混匀后，离心，即得抗原样品；
所述竞争剂为组氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸中的一种；
所述竞争剂的加入量为：每1ml油佐剂疫苗中加入1-40mg竞争剂。
2.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，所述竞争ELISA方法采用的步骤如下：
抗原包被：将已知浓度人工合成的口蹄疫抗原固相化吸附到ELISA板子上；
稀释抗体：将已知效价的抗体进行稀释，抗体稀释后效价为1:250000-1:1100000；
抗原稀释：在血清稀释板上，用稀释液将待检抗原样品稀释，标准抗原进行不同比例稀释形成不同浓度的标准抗原稀释液；
抗原标准曲线绘制及待检抗原样品的定量检测：将稀释好的待检抗原样品和不同浓度的标准抗原稀释液分别与稀释好的抗体在稀释板中进行完全反应，然后将各完全反应后的反应液分别加入到固相化抗原的ELISA板子中继续反应；反应结束后，各加入酶标记物、底物依次反应，再各加入终止液终止，测定OD值，采用不同浓度的标准抗原的OD值绘制抗原标准曲线，然后将待检抗原样品的OD值对应到所述抗原标准曲线中计算得待测抗原样品浓度，再乘以稀释倍数，除以破乳效率，即为待测抗原样品中抗原实际含量。
3.根据权利要求2油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，抗原包被步骤中，所述人工合成的口蹄疫抗原浓度为0.5μg/mL-5μg/mL。
4.根据权利要求2油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，抗原标准曲线绘制及待检抗原样品的定量检测步骤中，所述完全反应的时间大于等于60min，反应温度为37℃。
5.根据权利要求2油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，抗原标准曲线绘制及待检抗原样品的定量检测步骤中，所述各完全反应后的反应液分别加入到固相化抗原的ELISA板子中继续反应大于等于30min，反应温度为37℃。
6.根据权利要求2油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，抗原标准曲线绘制及待检抗原样品的定量检测步骤中，所述酶标记物为SPA-HRP，或者为羊抗猪生物素-IgG和亲和素-HRP。
7.根据权利要求2所述的口蹄疫合成肽疫苗破乳后的竞争ELISA定量方法，其特征在于，所述稀释后酶标记物的用量为100μL，稀释比例为1:5000-1:10000。
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