[发明专利]一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法

说明书

本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将油佐剂疫苗破乳后，所得水相抗原样品进行ZIPTIP纯化，纯化后的样品进行定性定量检测；所述破乳的方法为：将油佐剂疫苗与正丁醇混合，然后加入竞争剂，振荡混匀后，离心，即得水相抗原样品。该方法通过加入竞争剂与表面活性剂竞争抗原结合位点，从而将油佐剂疫苗中的抗原释放至水相中大大提高了水相中的抗原回收率；再将破乳后的样品采用ZIPTIP进行纯化，使样品中的杂质有效去除，大大提高了样品的纯度，由此再将样品进行定性定量分析，提高了检测结果的准确性和可靠性。

技术领域

本发明涉及口蹄疫疫苗检测技术领域，具体涉及一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法。

背景技术

现有的疫苗质量标准中规定效力检验必须采用本动物进行检验，由于国家实行100％的强化免疫政策，很难选出易感的检验用动物，而且动物攻毒对实验设施要求高(BSL3级实验室)、耗时长(一个月以上)、资金花费大。如果采用血清中和试验选择易感动物，在技术上难以排除具有细胞免疫的非易感动物，在检验实际中经常发生检验数据不规律的问题，影响检验的准确性。因此口蹄疫疫苗尤其是用于牛的疫苗的质量检测一直困扰着兽药监测部门和相关生产企业。因此需要尽快研制体外检验技术，代替现有的本动物试验。

当前国家对疫苗的检验正逐步过渡到对疫苗内抗原的检测，而当前较为普遍的方法为疫苗破乳后对抗原进行检测，通过将疫苗进行破乳处理，使抗原转移至水相中，继而对其进行后续的检测分析。众所周知，疫苗是由抗原与佐剂以一定比例、按特定程序乳化而成的，然而佐剂却为疫苗破乳检测带来了巨大障碍。

由于疫苗乳化过程中所使用的油佐剂中成分复杂，含有表面活性剂，免疫增强剂等物质存在，破乳后的水相中往往会含有上述杂质和破乳剂，行业内并没有能够去除上述杂质和破乳剂的方法，而杂质及破乳剂等还会大大影响其后的检测过程，造成信号掩盖或干扰，压低了抗原信号的强度，甚至无法有效检测到其中的抗原，由于其中杂质的随机分配性，造成其检测方法的重复性不佳，同时增加了仪器维护成本。在疫苗行业内，如何对油佐剂疫苗进行破乳并对疫苗内成分进行检测和鉴定是业内公认的技术难点，由于油佐剂疫苗成分复杂，其中又含有大量的表面活性剂及免疫增强剂等物质，会对所有检测方法造成干扰，甚至无法检测，不能反映出疫苗内抗原的真实状态。

虽然业内已有破乳方法，但其效率和效果均不佳，传统的破乳方法破乳后会有种种问题，例如破乳不完全、水相和油相分界不清晰、水相中检测不到抗原等问题一直困扰着业界。如何去寻找一种高效的破乳方法成了业内亟待解决的问题。

ZIPTIP方法为一种简易的质谱前除盐的方法，在分析检测中用于盐类物质的去除。现有技术中尚未有将该方法用于抗原纯化的报道。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，包括以下步骤：

将油佐剂疫苗破乳后，所得水相抗原样品进行ZIPTIP纯化，纯化后的样品进行定性定量检测；

所述破乳的方法为：将油佐剂疫苗与正丁醇混合，然后加入竞争剂，振荡混匀后，离心，即得水相抗原样品。

优选地，所述竞争剂包括氨基酸及其衍生物中的至少一种。

优选地，所述竞争剂为赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、组氨酸和脯氨酸中的一种。

优选地，所述竞争剂的加入量为：每1ml油佐剂疫苗中加入1-40mg竞争剂，更优选1-20mg竞争剂。所述竞争剂的浓度过高，会导致竞争剂饱和析出，影响超滤过程；浓度过低，会导致竞争效果不佳，无法释放足够检测的抗原。

优选地，所述油佐剂疫苗与正丁醇的体积比为9：1～5：5。