[发明专利]一种双相酶水解获取宝藿苷I的方法

说明书

本发明涉及一种双相酶水解获取宝藿苷I的方法，属于医药技术领域；本发明采用的提取工艺以淫羊藿苷为原料，由含酶的缓冲溶液和乙酸乙酯构筑的双相溶剂系统获取宝藿苷I；本发明中的双相酶水解法将淫羊藿苷的酶水解与宝藿苷I的萃取两步合为一步，并且使淫羊藿苷一经酶水解产生宝藿苷I即从缓冲溶液层转移至乙酸乙酯层，可有效推动水解反应的进行，是一种水解率和提取率高、操作简便的方法。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种双相酶水解获取宝藿苷I的方法。

背景技术

宝藿苷I（Icariside I，又名淫羊藿次苷II）为小檗科淫羊藿属植物淫羊藿（Epimedium brevicornum Maxim.）中的一种多羟基黄酮类单体成分，有较好的抗肿瘤和抗骨质疏松活性，明显优于淫羊藿中其他黄酮苷类化合物，有被开发成具有良好疗效的抗癌药物的前景。

宝藿苷I是淫羊藿苷脱去一分子葡萄糖的产物（见图1），有报道大鼠口服淫羊藿苷后在粪便和尿液中均检出宝藿苷I，推测大鼠肠菌酶可将淫羊藿苷转化为宝藿苷I，吸收入血的主要为宝藿苷I，亦有文献报道其生物药剂学性质明显优于淫羊藿中其他黄酮类多糖苷，可能是其药效显著的主要原因。

宝藿苷I可以从淫羊藿植物中直接提取，然而淫羊藿中一般以淫羊藿苷形式存在，宝藿苷I的含量很低，只有约0.17 mg/g，且淫羊藿中极性相当的成分很多，分离纯化较困难，产率较低，故单纯提取分离难以满足应用的需求，因此目前主要是通过淫羊藿苷制备宝藿苷I。传统的酸水解或碱水解反应，反应条件苛刻，操作复杂，不利于环境保护，且反应彻底，使得淫羊藿苷及其他黄酮苷类成分上连接的糖全部水解，得到相应的苷元，而不是宝藿苷I等次级苷，所以采用酸碱水解法水解淫羊藿苷或提取物制备宝藿苷I是不可行的，因此目前常采用酶解法。酶水解反应反应条件温和，操作简便，且有利于环境保护，但是酶在有机溶剂中无法发挥效应，而淫羊藿苷在水性酶解体系中溶解度很低，限制了其与酶接触的几率，导致酶解转化周期较长，不利于规模化生产，长期以来相关研究者进行了很多有益的尝试，例如采用超声辅助或者采用环糊精包合技术的方法促进淫羊藿苷溶解，该类技术在一定程度上提高了转化速率和产率，但仍存在以下缺点：一是酶解产物宝藿苷I与淫羊藿苷同时存在，酶解反应无法进行完全；二是操作步骤多，必须采用适当的溶剂把宝藿苷I从水性酶解体系中分离出来；三是酶解反应体系中成分复杂，酶回收困难。

随着宝藿苷I研究的深入，其活性逐渐明确，因此其制备技术也受到越来越多的重视，而适合产业化生产的工艺还未有报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有宝藿苷I制备技术中操作步骤多、成本较高、得率较低、周期长等不足，提供一种基于双相酶水解技术从淫羊藿中直接获取宝藿苷I的方法。

本发明双相酶水解法获取宝藿苷I的方法，实施流程图如图3所示，具体按照下述步骤进行：

（1）称取淫羊藿苷粉，加入醋酸-醋酸钠缓冲溶液或者磷酸盐缓冲溶液，混匀，得到淫羊藿苷混悬液；

（2）步骤（1）所得淫羊藿苷混悬液中加入水解酶，混匀，并加入乙酸乙酯，调节搅拌转速后加热，使得淫羊藿苷在双相溶剂条件下进行水解反应，冷却；

（3）分取乙酸乙酯溶液，减压回收溶剂至干，即得宝藿苷I。

其中，步骤（1）中的淫羊藿苷是指淫羊藿苷含量为80%及以上的淫羊藿苷粗品或淫羊藿苷纯品；

所述醋酸-醋酸钠缓冲溶液的pH值介于3.5～5.5；所述磷酸盐缓冲溶液的pH值介于3.5～5.5；

所述淫羊藿苷与缓冲溶液的比例为1 g:100～10000 mL；

步骤（2）中所述的酶为β-葡萄糖苷酶、纤维素酶或β-葡聚糖酶中的一种；

所述淫羊藿苷与酶的体积比为1:40～10:1；