[发明专利]蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽及其应用。本发明使用前期制备的蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体3H7细胞株，利用噬菌体展示肽技术对3H7细胞株识别的抗原表位进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，结果表明3H7细胞株识别的抗原表位为QYHAM。进一步合成短肽利用间接ELISA对3H7细胞株进行鉴定，实验结果表明3H7细胞株识别的抗原表位为QYHAM；氨基酸序列比对显示该表位在不同来源的25型蓝舌病病毒毒株间保守。本发明鉴定了蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽，为建立针对蓝舌病病毒的竞争ELISA方法奠定了基础，鉴定出的抗原表位也可应用于今后疫苗设计中，对于我国蓝舌病的防治具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种抗原表位多肽，特别涉及一种蓝舌病病毒25型VP7蛋白单克隆抗体3H7细胞株识别的蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽及其在检测蓝舌病病毒中的用途，本发明属于生物技术领域。

背景技术

目前世界上多个国家都已分离到蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)，并且随着全球气候变暖该病的分布范围在不断的扩大，呈现全球性分布。迄今为止已发现27种血清型的蓝舌病病毒，各型之间无交叉保护^[1-2]。世界动物卫生组织(OIE)将蓝舌病列为必须通报疫病，我国也将蓝舌病列为一类疫病。该病主要通过库蠓、伊蚊等进行传播，也可经由胎盘感染胎儿进行垂直传播^[3]。BTV主要感染绵羊等反刍类动物，其主要症状为病畜体温升高，精神萎靡、厌食流涎，患畜诸多部位出现不同程度的水肿。口腔黏膜充血、糜烂、发绀，为蓝舌病的典型症状。BTV25型于2008年从瑞士山羊血液样本中分离获得。BTV 25型的VP2与其他血清型病毒VP2的同源性仅为23％-79％。感染BTV25型的牲畜无典型症状，常常被忽略，疫病一旦爆发，会造成极为严重的经济损失^[4]。

蓝舌病于1876年首次发现以来，新的血清型不断的被发现，同时爆发的范围也在逐渐的扩大。2014年在法国科西嘉岛首次发现并分离到了27型蓝舌病病毒^[5]，有报道称目前正在中东及南非相继发现并正在分离28型和29型蓝舌病病毒[^6-7]。我国已检测出BTV-1、BTV-2、BTV-3、BTV-4、BTV-12、BTV-15、BTV-16七种血清型，其中BTV1型和16型为我国主要的致病血清型^[8]。

BTV基因组由10个线性双链RNA组成，总分子量为1.3×107Da。基因组由大片段(L1-L3)、中片段(M4-M6)、小片段(S7-S10)组成，其共编码7个结构蛋白(VP1-VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a和NS4)^[9-10]。蓝舌病的病毒有双衣壳结构，L2和M5基因编码的VP2和VP5是构成BTV外壳主要成分，约为病毒总蛋白的40％。病毒内壳即核心衣壳主要由L3和S7编码的VP3和VP7构成。VP7在核衣壳内主要是以三聚体的形式存在，VP3是亚核心颗粒的主要蛋白，两者均是BTV群特异性抗原。

病毒基因组及VP1、VP4、VP6三种结构蛋白被包裹在核心衣壳内部^[11]。VP7蛋白是用于建立BTV群特异性血清学检测方法的最佳选择，由于在所有血清型当中其序列和抗原性是高度保守。细胞被BTV感染后，VP7是最早被检测出的抗原，而且BTV感染动物后，抗VP7抗体是机体产生的抗BTV主要的抗体之一。在缺乏VP2或VP5的情况下VP7可调节BTV对昆虫细胞的吸附和侵入^[12]。

因此，蓝舌病病毒VP7蛋白的群特异性抗原表位多肽的鉴定，对于BT疫苗的设计及高通量蓝舌病病毒检测试剂盒的研制均具有重要意义。

参考文献：

[1]苗志强，郑明学等.蓝舌病流行状况及防控措施[J].黑龙江畜牧兽医，2010(5)：28-30.