[发明专利]一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法

权利要求书

1.一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：

（1）合成吖啶-9-酰氯：将吖啶-9-羧酸溶于三氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶，缓慢滴加亚硫酰氯，并回流该反应混合物，减压除去溶剂得到黄色固体；

（2）合成9,10-二氢化吖啶-9-酰氯：将吖啶-9-酰氯悬浮于甲醇中，分别先后加入氯化铵和锌到该溶液中，回流反应该反应混合物，过滤该溶液并用甲醇洗涤该沉淀，蒸发干燥得到产物9,10-二氢化吖啶-9-酰氯；

（3）合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯：将9,10-二氢化吖啶-9-酰氯溶于甲苯溶液中，冰浴控温，加入碳酸二甲酯和碳酸铯，搅拌反应，升温至室温，搅拌反应，蒸发干燥除去溶剂，加入乙酸乙酯做萃取剂，减压除去萃取剂得到产物10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯；

（4）合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯：将制备好的10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯溶于三氯甲烷中，分别加入3-乙氧基苯硫酚和4-二甲氨基吡啶，冰浴控温0～10℃，搅拌反应，然后撤去冰浴，室温再反应，干燥蒸发得到产物10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯；

（5）合成9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基）-10-甲基-9,10-二氢化吖啶二（氰乙基）酯：将10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯溶于四氢呋喃溶液中干冰浴维持-80℃条件下，滴加入2mol/L 溶于四氢呋喃的LDA，搅拌反应后，加入三氯氧磷和4-二甲氨基吡啶，连续搅拌，撤去干冰浴自然升温并再继续搅拌，再用冰浴冷却该溶液并缓慢滴加3-羟基丙腈，加完后撤去冰浴室温搅拌，滤去沉淀并减压除去反应试剂，将残留物溶于乙酸乙酯，用氮气作为保护剂，滴加入2MOL/L氢氧化钾溶液，搅拌反应，抽滤所形成的沉淀并 空气干燥，得到微黄色固态产物9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基）-10-甲基-9,10-二氢 化吖啶二钾盐。

2.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中吖啶-9-羧酸用量为1g～5g， 4-二甲氨基吡啶用量为0.2g～5g，亚硫酰氯用量为2～5mL，反应时间为6～12小时。

3.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中吖啶-9-酰氯用量为0.5～2.0g，氯化铵用量为5～10g，锌用量为5～10g，回流反应时间为1～2小时。

4.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中9,10-二氢化吖啶-9-酰氯用量为1g～5g，冰浴控温0～10℃，碳酸二甲酯用量为0.5～1g，碳酸铯用量为0.1～0.5g，搅拌反应时间为30～60分钟，升温至室温后，搅拌反应时间为1～2小时。

5.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法，其特征在于，步骤（4）中10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯的用量为0.5～5g， 3-乙氧基苯硫酚的用量为1g～5g，4-二甲氨基吡啶的用量为0.5g～2g，冰浴控温0～10℃，搅拌反应30～60分钟，然后撤去冰浴，室温再反应1～2小时。

6.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法，其特征在于，步骤（5）中的10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯的用量为0.5～2.0g，搅拌反应时间为1～2小时，三氯氧磷的用量为0.1～1.0g， 4-二甲氨基吡啶的用量为1～2g，连续搅拌时间为1～2小时小时，撤去干冰浴自然升温并再继续搅拌时间为1～2小时，3-羟基丙腈的用量为1～2mL，加完后撤去冰浴室温搅拌时间为6～12小时，2mol/L氢氧化钾溶液用量为0.5～1.0mL。