[发明专利]用于检测人类CYP2D6基因多态性的核酸、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于快速检测CYP2D6基因多态性的核酸、试剂盒及方法，具体用于对CYP2D6*10基因C100T和G4268C、CYP2D6*14基因G1758A的位点多态性进行检测。本发明提供用实时荧光定量PCR快速检测CYP2D6基因多态性的检测试剂盒能够用于临床多种类型样本的检测，具有特异性强，灵敏度高，实验周期短，操作简单，安全无毒，成本低等显著优，其检测方法，操作简便，自动化程度高，大大简化了操作过程，并减少了在操作过程的污染，检测效果准确、可靠。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测人类CYP2D6基因多态性的核酸、试剂盒及方法。

背景技术

CYP2D6是CYP酶家族中的重要成员之一，该基因位于22q13.1，含有9个外显子和8个内含子，总长为7kb左右，是一个完整的功能性基因。研究表明，肝脏中CYP2D6只占2-9％，但却参与20％～30％药物的代谢，包括抗抑郁药、抗心律失常药、抗精神病药、镇痛药等。CYP2D6具有广泛的基因多态性，目前已经报道的有100多种基因变异，如单一碱基的突变、缺失或插入和大片段的缺失。这些基因变异可引起酶活性和数量的差异，从而导致药物代谢个体差异的产生。CYP2D6的代谢表型可分为超快代谢型(UMs)、快代谢型(EMs)、中等代谢型(IMs)、慢代谢型(PMs)。

他莫昔芬也叫枸橼酸他莫昔芬(tamoxifen)，为一种选择性雌激素受体调节剂(SERM)。这种药物结构类似雌激素，能模拟雌激素的作用，与雌激素受体结合形成稳定的复合物，并转运入核内，阻止染色体基因开放，从而使癌细胞的生长和发育受到抑制，是目前治疗某些乳腺癌和卵巢癌以及乳腺增生的有效药物之一。他莫昔芬口服后主要在肝内代谢，主要代谢物为N-去甲基三苯氧胺和4-羟基三苯氧胺，与雌激素受体的亲和力和抑制癌细胞增值的能力比他莫昔芬高至少100倍。

近年来，为提高他莫昔芬临床应用的安全性和有效性，国内外学者对他莫昔芬药效的影响因素进行了大量研究，相关研究结果表明药物代谢相关基因的多态性是引起个体药效差异的重要原因之一。他莫西芬作为无活性的前药，在体内主要由CYP2D6催化形成有活性的化学成分Endoxifen，发挥药物疗效，因此CYP2D6基因多态性导致的酶活性改变将直接影响他莫西芬用药效果。所以CYP2D6基因的分型检测对于临床他莫西芬用药指导有重要意义。

CYP2D6基因多态性在不同种族人群中的分布频率具有较大的差异，东方人群中突变频率较高的是CYP2D6*10和CYP2D6*14基因多态性。CYP2D6*10在东方人群中分布频率高达40％～49.5％，CYP2D6*14为东方人特有的等位基因，分布频率约为1％-2％，这两种基因型是造成东方人CYP2D6酶慢代谢型和弱代谢型的主要原因。因此，综合检测CYP2D6*10和CYP2D6*14基因多态性可以筛选那些在更能在TAM治疗中受益的患者，这对于临床个体化化疗方案的制定具有重要意义。

目前，CYP2D6基因多态性检测的主要方法有：测序法、芯片法和溶解曲线法。测序法是基因多态性检测最常见的方法，也是基因多态性位点检测的金标准，尽管该方法具有高通量、多位点的优势，但该方法同时存在操作繁琐、灵敏度低、样品易污染，导致假阳性结果，及仪器成本高等问题。芯片法需先进行PCR扩增，之后将含有目的SNP位点的PCR产物与突变探针、野生探针杂交，通过比较两个探针杂交的信号强度判断样品基因型。该方法操作过程繁琐，无法实现批量化和自动化，且结果不易判读，假阳性概率高。对于溶解曲线法，不管是染料溶解曲线还是探针溶解曲线法，都无法有效区分同一位点的多种突变类型。液相芯片法操作过程复杂，且容易污染，假阳性率高。

发明内容

为克服现有技术检测技术的不足，本发明的目的是提供一组用于检测CYP2D6基因多态性的核酸。本发明的另一个目的是提供一种用于检测CYP2D6基因多态性的试剂盒及其检测方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：