[发明专利]一种青蒿琥酯的新应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种逆转肺腺癌厄洛替尼耐药，属于肺癌治疗领域。

背景技术

肺癌是导致癌症相关性死亡主要的原因，分子靶向治疗的出现为肺癌的治疗带来了新的希望，其有明确的作用位点，而且不良反应小，疗效确切。分子靶向药物的缺点是其价格昂贵、不能完全清除病灶，并且最终会产生耐药，这一点限制了其在临床上的应用。。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种青蒿琥酯的新应用，以解决现有分子靶向药物最终会产生耐药，限制其在临床上应用的问题。

为解决上述问题，拟采用这样一种青蒿琥酯的新应用，青蒿琥酯用于逆转肺腺癌厄洛替尼耐药，进一步地，青蒿琥酯和厄洛替尼联合用药。

青蒿琥酯用于肺腺癌厄洛替尼耐药的逆转研究方法：

ART对人肺腺癌PC9细胞的体外抗瘤活性研究：培养PC9细胞株，加入不同浓度的ART，用cell Counting Kit-8(cck-8)检测PC9细胞的增殖率，Real-time RT-PCR和western-blot检测EGFR、IGF1R、AXL和Akt mRNA、蛋白及凋亡相关蛋白的表达；

厄洛替尼继发性耐药细胞系的培养及耐药性的检测：用cck-8法检测PC9/ER的增殖率，计算耐药倍数，Real-time RT-PCR和western-blot检测EGFR、IGF1R、AXL、Akt mRNA和蛋白的表达；

体外实验验证ART逆转肺腺癌ER耐药的作用及机制：在PC9/ER细胞株中加入不同浓度的ART、ER或联合用药，并以LY294002为阳性对照，用cck-8法测增殖率，Real-time RT-PCR和western-blot检测EGFR、IGF1R、AXL和Akt m RNA和蛋白的表达；

通过裸鼠移植瘤体内实验验证ART逆转肺腺癌ER耐药的作用及机制，厄洛替尼继发性耐药细胞系简称PC9/ER，厄洛替尼简称ER，青蒿琥酯简称ART。

与现有技术相比，本发明所述青蒿琥酯能够有效逆转肺腺癌厄洛替尼耐药，配合厄洛替尼后能够有效地改善肺癌预后，很好地解决了分子靶向药物会产生耐药的问题，进一步推进分子靶向药物在临床上的应用。

附图说明

图1光学显微镜下不同浓度青蒿琥酯处理PC9细胞后细胞数量及形态学的变化(x200)，其中：

A：0.1％DMSO对照组；B：青蒿琥酯25μmol/L组

C：青蒿琥酯50mol/L组；D：青蒿琥酯100mol/L组；

图2青蒿琥酯对PC9细胞的增殖抑制作用；

图3青蒿琥酯处理48h后细胞中EGFR、IGF1R、AXL和Akt mRNA的相对表达，注：*p<0.05vs control**p<0.01vs control；

图4青蒿琥酯处理48h后PC9细胞中EGFR、IGF1R、AXL和Akt及其磷酸化的表达水平；

图5青蒿琥酯处理48h后PC9细胞中凋亡相关蛋白的表达水平；

图6青蒿琥酯对PC9细胞和PC9/ER细胞的增殖抑制作用；

图7不同实验组作用于PC9/ER细胞后IGF1R和AXL的蛋白表达及磷酸化水平变化情况；

图8不同实验组作用于PC9/ER细胞后Akt的蛋白表达及磷酸化水平变化情况；

图9不同实验组作用于PC9/ER细胞后凋亡相关蛋白的表达及磷酸化水平变化情况；

图10不同实验组裸鼠体重变化情况；

图11不同实验组裸鼠瘤体体积变化情况，注：*p<0.05vs Con组n＝5。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对发明作进一步地详细描述。

实验例1：

青蒿琥酯对人肺腺癌PC9细胞的体外抗瘤活性研究

1材料与方法

1.1主要实验材料

1.1.1细胞株

人肺腺癌PC9细胞由第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所陈正堂教授惠赠。

1.1.2主要试剂

1.1.3主要材料设备

1.2实验方法

1.2.1细胞的复苏、培养、传代与冻存

肿瘤细胞的复苏与培养