[发明专利]一种解磷菌PC05及其分离筛选方法

说明书

本发明公开了一种解磷菌PC05及其分离筛选方法，所述解磷菌PC05菌株名称为Inquilinus ginsengisoli PC05，已于2016年6月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016347，地址：中国，武汉，武汉大学。本发明培养制得的一种解磷菌PC05可以丰富野生解磷菌遗传资源，具有较高的解磷能力,增加土壤中有效磷的含量，提高土壤中难溶性磷的利用效率，减少磷肥施用量。

技术领域

本发明涉及一种农业微生物技术领域，具体涉及一种解磷菌PC05及其分离筛选方法。

背景技术

磷在植物体中的含量仅次于氮和钾，是植物生长发育的关键营养元素之一。缺磷土壤一般是指土壤有效磷(P)小于10mg/kg的土壤，我国缺磷土壤面积超过耕地总面积的74％，土壤中的磷绝大部分以难溶性磷酸盐形式存在，植物无法直接吸收利用。为满足生产需要，我国绝大部分的耕种田都要大量补充磷化肥，由于长期的累积和富集，造成了土壤板结、营养元素失衡等一系列生产、生态问题，故如何改善和提高我国耕作田土壤磷的利用率，仍然是一项战略性课题。从已有的文献报道来看，解磷菌种类繁多复杂，解磷能力也参差不齐，并且应用于实际生产的菌种种类少，缺乏创新，从这个角度看，筛选具有较强解磷能力野生菌株的工作仍然具有重大意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种解磷菌PC05及其分离筛选方法，可以丰富野生解磷菌遗传资源，获取具有较强解磷能力的解磷菌株。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种解磷菌PC05，所述解磷菌PC05菌株名称为Inquilinusginsengisoli PC05，已于2016年6月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016347，地址：中国，武汉，武汉大学。

一种如权利要求1所述的解磷菌PC05的分离筛选方法，包括如下步骤：

(1)无机磷固体培养基的制备：按重量份数计，培养基由下述成分组成：葡萄糖10g、(NH₄)₂SO₄ 0.5g、MgSO₄·H₂O 0.3g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、FeSO₄·7H₂O 0.03g、MnSO₄·H₂O 0.03g、Ca₃(PO₄)₂ 5g、琼脂20g、蒸馏水1000g；将Ca₃(PO₄)₂与其余成分分开灭菌后混合，调节pH为7.0～7.2；

(2)取10mL猪泡粪液样品，放入带有玻璃珠的试剂瓶中，加入90mL无菌水，在28～30℃恒温振荡30～45min，使样品均匀分散于无菌水中，得到稀释倍数为10^-1的菌悬液，将菌悬液静置后取上清液，依次稀释得到10^-3、10^-5、10^-7倍浓度梯度的样品菌悬液，10^-3、10^-5、10^-7倍浓度梯度的菌悬液各取0.1mL，依次均匀的涂布在无机磷固体培养基上，放入恒温培养箱中，在30℃条件下恒温培养3～5天后，观察并记录菌落及溶磷圈的大小，做好菌种标记，筛选出6株解磷菌PC01、PC02、PC03、PC04、PC05、PC06，比较6株解磷菌在无机磷固体培养基上的溶磷圈直径(HD)与菌落直径(CD)的比值，筛选出HD/CD值最大的菌株即为解磷菌PC05。

如上述所述的解磷菌PC05的鉴定方法为：利用引物27F和1492R对菌株PC05进行扩增和正向测序，得到序列长度为1445bp，通过BLAST将序列与GenBank数据库中序列进行对比，其与NR_112560.1相似性超过99％，鉴定其为Inquilinus ginsengisoli。