[发明专利]一种用于检测寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒的试剂盒。本发明保护引物探针组合，由引物探针组Ⅰ、引物探针组Ⅱ和引物探针组Ⅲ组成；引物探针组Ⅰ由引物ZIKV‑F、引物ZIKV‑R和探针ZIKV‑P组成；引物探针组Ⅱ由引物DENV‑F、引物DENV‑R1、引物DENV‑R2和探针DENV‑P组成；引物探针组Ⅲ由引物CHIKV‑F、引物CHIKV‑R和探针CHIKV‑P组成；引物ZIKV‑F、引物ZIKV‑R、探针ZIKV‑P、引物DENV‑F、引物DENV‑R1、引物DENV‑R2、探针DENV‑P、引物CHIKV‑F、引物CHIKV‑R、探针CHIKV‑P依次如序列1至10所示。本发明对于寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅热病毒的检测和相关疾病的防控具有重大价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒的试剂盒。

背景技术

蚊媒病毒在全世界分布广泛，是一种重要的传染病病原，主要通过蚊虫叮咬传播，传播速度快，易对人类和社会造成严重危害，特别是近年来，不断爆发蚊媒病毒疫情。蚊媒病毒大多属于黄热病毒科黄热病毒属，主要有黄热病毒、登革热病毒以及寨卡病毒，还有少数为膜病毒科甲病毒属，例如基孔肯雅病毒，这些病毒都属于蚊媒传播病毒，且近年来，不断有疫情爆发。2015年-2016年在巴西爆发寨卡病毒疫情，迅速蔓延至30多个国家和地区，同时在欧洲、北美等地的多个国家均报告发现输入性病例，我国今年也报告了多例输入性病例，由于寨卡病毒可能导致胎儿小头畸形、引起格林-巴利综合征而受到广泛关注。近年来，引起过大规模传染病爆发的蚊媒病毒还有登革热病毒和基孔肯雅病毒，世界卫生组织每年都收到大约50万份登革热病例的报告。

目前，我国已有研究机构研制出基于实时荧光定量PCR探针法的寨卡病毒检测方法、登革热病毒检测方法和基孔肯雅病毒检测方法，但这些方法均为单指标的病毒检测方法。如果需要同时筛查相关的蚊媒病毒，需要用到多种试剂盒，样品消耗量大，操作复杂，成本高昂。

目前基于实时荧光定量PCR探针法的核酸检测试剂，由于试剂中的DNA聚合酶和逆转录酶必须保存于-20℃条件下，因此，这类核酸检测试剂均需使用干冰，以保证冷链运输和低温储存，保证试剂盒不失效。但由于蚊媒相关病毒，如寨卡病毒、登革热病毒、基孔肯雅病毒等的多发地集中于非洲、南美和东南亚等热带地区，受当地气候条件及经济状况的限制，绝大多数地方要实现试剂的冷链运输非常困难，使得这些核酸检测试剂在这些地区的应用受到很大的限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测寨卡病毒、登革热病毒和基孔肯雅病毒的试剂盒。

本发明首先保护引物探针组合(引物探针组合甲)，由引物探针组Ⅰ、引物探针组Ⅱ和引物探针组Ⅲ组成；

所述引物探针组Ⅰ由引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探针ZIKV-P组成；

所述引物ZIKV-F为如下(b1)或(b2)；

(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物ZIKV-R为如下(b3)或(b4)；

(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探针ZIKV-P的核苷酸序列为如下(b5)或(b6)；

(b5)如序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；