[发明专利]EXT1在肝癌诊断治疗中的应用

说明书

本发明公开了一种EXT1在肝癌诊断治疗中的应用。本发明还公开了shRNA稳定抑制肝癌细胞EXT1基因的表达在制备治疗肝癌药品中的应用。本发明证明了EXT1可以作为肝癌的诊断标志物和治疗靶标，通过检测EXT1的表达水平可以对感染乙肝病毒后发展为肝硬化、肝癌的高危人群进行监控，对其肝癌发生进行早期诊断，通过抑制EXT1的表达可以辅助临床手术治疗提高肝癌病人的治愈率，改善病人的生活质量。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，尤其涉及一种EXT1在肝癌诊断治疗中的应用。

背景技术

肝癌是死亡率仅次于胃癌、食道癌的第三大常见恶性肿瘤，中国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。早期肝癌多无症状或仅有轻微症状，大约80％的肝癌病人一经发现就就已到晚期，这些患者生存期大多在半年之内，对人类的生存健康构成了极大的威胁。

目前，肝癌的早期诊断主要依靠血清甲胎蛋白(AFP)检测结合超声显像对高危人群的监测。另外，电子计算机X线体层摄影(CT)可显示直径1.0cm以上的肿瘤，对早期诊断有一定帮助。临床上对肝癌的治疗仍以手术切除为首选，早期切除是提高生存率的关键。但由于根治切除仍有相当高的复发率，故术后宜定期随访观察以监察复发。找到及早诊断肝癌的有效方法，根据标志物的表达水平分析病人的预后情况，据此对病人在外科手术的基础上进行针对靶标分子进行辅助治疗显得尤为重要。

到目前为止，很多生物标志物都不能很好的用来作为临床诊断标识，仅有助于辅助诊断，或判别肿瘤的预后及化疗疗效。目前临床常用的生物诊断标志物是甲胎蛋白(AFP)，由胎儿的肝脏、卵黃囊等处所分泌，一般由抽血检验血中浓度，正常值应小于20ng/ml。AFP诊断肝癌的准确率仅有60％～80％；存在假阳性和假阴性的情况。在许多情況或疾病会使AFP值升高，例如：怀孕、非恶性疾病－神经管缺陷、畸胎瘤、急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝炎愈合时，以及其他恶性疾病，如生殖細胞瘤等。相反，极小的肝脏肿瘤，AFP可表达过低或延迟；肿瘤太大，分泌的AFP超过检测最大范围，也可出现假阴性现象。

综上所述，AFP的血中浓度检验值，只能作为辅助诊断或追踪病情、评估化疗效果之参考，无法以此来当作早期诊断肝癌的绝对工具。

乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒科。HBV是致肝癌的重要因子。肝癌大多由肝炎转化为肝硬化，最后才形成癌变，因此有“肝炎－肝硬化－肝癌”三部曲发展演变的经过。有数据显示肝癌病例90％感染过HBV。另有研究提示20年HBV感染史者，约有5％-10％的发生癌变，癌变机制之一是HBV的部分基因片段整合到肝细胞基因上，发生了突变，引起某些致癌基因激活、抑癌基因(TSG)失活等。寻找HBV整合到肝细胞的基因，是研究病毒致癌变的出发点。进一步研究病毒整合如何导致致癌基因激活、抑癌基因失活，再明确功能异常的基因如何诱导其下游信号传导途径异常，是研究肝细胞癌变机制的重要手段。另一方面，研究病毒导致的宿主肝细胞基因过表达，或基因沉寂、表达的缺陷，这不仅可以用来作为早期诊断肿瘤的辅助工具；同时可以结合开发特异性的封闭/激活抗体(药物)，定向的调节肿瘤组织靶基因活性及其相关信号传递通路，结合临床手术治疗达到更有效的治疗肿瘤。

我们前期着重研究了患者感染过乙肝病毒后机体通过自身免疫力清除了病毒但随后发展至肝癌的病例。我们采用了病毒捕获技术对宿主肝癌细胞进行分析，发现患者肝细胞内残留有HBV感染时整合的病毒片段(见摘要附图)。用乙肝病毒的DNA寡核苷酸对病毒片段进行捕获，同时联合单细胞全基因组测序，将病毒整合区域附近的基因进行全基因组测序。我们发现多数肝癌细胞能检测到有HBV的S基因片段插入宿主8号染色体MED30-EXT1的基因间隔区域(如图1所示)。而这一病毒整合事件在癌旁的非肝癌细胞里是不多见的。病毒整合MED30-EXT1的基因间隔区域直接导致EXT1在肝癌组织里过表达，不仅促进病毒的侵袭，同时诱导肝细胞表型异常、肿瘤细胞的生长。EXT1基因编码具有746个氨基酸残基的蛋白，EXT1(Exostoses-1，乙酰肝素共聚合酶)。它是位于高尔基体和内质网上的II型跨膜蛋白。而关于EXT1在病毒整合至肝细胞及肝癌的发生中的作用及其相关应用尚未见相关报道。