[发明专利]一种猪源大肠杆菌的分离鉴定方法

权利要求书

1.一种猪源大肠杆菌的分离鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）细菌分离培养：将采集的样品接种于营养肉汤培养基中，培养后取菌液划线接种于麦康凯琼脂培养基上，观察菌落生长情况，挑取单个或成对的红色菌落接种于伊红美蓝琼脂培养基上，观察菌落生长情况，挑取单个或成对的紫黑色菌落备用；

2）革兰氏染色、镜检；

3）生化鉴定试验；

步骤1）中营养肉汤培养基的组成为：蛋白胨7~8g，牛肉膏2~2.5g，氯化钠3.5~4g，蒸馏水750mL，pH值7.0~7.4；麦康凯琼脂培养基的组成为：蛋白胨12~18g，牛胆盐3.5~4g，氯化钠3.5~4g，琼脂10~15g，乳糖7~8g，中性红0.01~0.03g，蒸馏水750mL，pH值7.0~7.4；伊红美蓝琼脂培养基的组成为：蛋白胨7.5~8.5g，乳糖7~8g，磷酸氢二钾1.2~1.8g，琼脂15~20g，2%伊红水溶液12~18mL，0.5%美蓝水溶液10~15mL，蒸馏水750mL，pH值7.2~7.4；

步骤2）中革兰氏染色的操作为：将挑取的菌落涂片固定，先用草酸铵结晶紫初染，再用碘液媒染，脱色后用复红染液复染；步骤2）中镜检为：用香柏油覆盖涂菌部位，显微镜下观察染色情况和细菌形态。

2.根据权利要求1所述的分离鉴定方法，其特征在于：步骤1）中营养肉汤培养基的组成为：蛋白胨7.5g，牛肉膏2.3g，氯化钠3.8g，蒸馏水750mL，pH值7.2；麦康凯琼脂培养基的组成为：蛋白胨15g，牛胆盐3.8g，氯化钠3.8g，琼脂12g，乳糖7.5g，中性红0.02g，蒸馏水750mL，pH值7.2；伊红美蓝琼脂培养基的组成为：蛋白胨8g，乳糖7.5g，磷酸氢二钾1.5g，琼脂18g，2%伊红水溶液15mL，0.5%美蓝水溶液12mL，蒸馏水750mL，pH值7.3。

3.根据权利要求1或2所述的分离鉴定方法，其特征在于：步骤1）中培养的温度为36~38℃，培养时间15~20h。

4.根据权利要求1所述的分离鉴定方法，步骤3）中生化鉴定为大肠杆菌的菌株接种于营养肉汤培养基中，培养后取菌液与灭菌的甘油混合制成甘油菌，于-20℃以下保存菌种。