[发明专利]一种以鸡头黄精鳞茎为外植体的种苗快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以鸡头黄精鳞茎为外植体的种苗快速繁殖方法。

背景技术

黄精(Polygonatum sibiricum Delar.ex Redoute)别名鸡头黄精、鸡头参，属百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)多年生草本植物，主要分布于宁夏六盘山地区，是药食兼用的大宗中药材，在我国已有2000多年的药用历史。黄精以干燥根茎入药，味甘性平，用于胃阴不足，脾胃气虚，体倦乏力，口干食少，肺虚燥咳，精血不足，痨嗽咳血，腰膝酸软，须发早白，内热消渴等功效(中华人民共和国药典2010)。

随着现代市场经济的发展，对黄精药理作用的认识不断深入，黄精药材的需求量不断增加，同时对黄精多种功能的深入研究，天然保健与功能食品的开发研制，黄精的市场需求量逐年增加，采集野生黄精不但不能满足市场需求，更破坏了生态环境和黄精野生资源。目前，黄精繁殖方式主要为有性繁殖(种子)和无性繁殖(根茎)两种方式，采用根茎繁殖，品种更新速度慢、易感染病毒病，多代繁殖后品种退化严重；同时用种量大，每公顷需黄精2250kg，需要大量采挖野生黄精，对种源和环境破坏严重。采用种子繁殖，存在生长周期长(从播种到采收需4～5年)，且种子发芽、成苗率低等问题。无法大批量的生产种苗，常规繁殖方法已不适应黄精产业迅速发展的需求。组织培养技术是现代先进的植物离体繁殖技术，它不仅克服了种子繁殖中存在的诸多问题，还克服了常规无性繁殖速度慢、繁殖率低的缺点，且组织培养不受季节、气候等因素制约，组织获得的种苗生长均一，可以在室内稳定进行周年培养生产。

但目前还未见到关于鸡头黄精人工快速繁育的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种以宁夏产鸡头黄精鳞茎为外植体的种苗快速繁殖方法，是一种高效、快捷的繁殖技术，短时期内即能够实现规模化种苗生产，在一定程度解决了鸡头黄精种苗资源短缺的问题。

一种以鸡头黄精鳞茎为外植体的种苗快速繁殖方法，其特别之处在于，包括如下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：选择秋季新鲜、成熟的当年生鸡头黄精鳞茎球，除去基部残余的老根，先用流水冲洗30min，然后投到体积份数为2％的次氯酸钠溶液中浸泡20min，再用清水冲洗干净，接着转入超净工作台，在超净工作台上先用75％的乙醇浸泡20s，然后用无菌水冲洗3-4遍，再转入0.1％的升汞溶液中浸泡8min，该升汞溶液每升含0.1mL吐温20，然后用无菌水冲洗4-5次后备用；

(2)材料的处理：将即步骤(1)得到的的鳞茎球用无菌滤纸吸干表面的水分，在超净工作台内用刀刮去栓皮层，然后将鳞茎球先横切为2块，保留有萌动芽的上半部分，再将下半部分纵切为3-5mm的2块，将这3块鳞茎作为外植体备用；

(3)启动培养：在无菌条件下将步骤(2)处理好的外植体接种到启动培养基中，每瓶接种1块，该培养基是在Ms培养基中额外添加了1.0mg/L～3.0mg/L的6-BA、0.5mg/L～1.0mg/L的NAA和10.0mg/L～20mg/L病毒唑，蔗糖30g/L，琼脂粉5.0g/L，(用NaOH，下同)调整pH值为5.8，培养温度18±1℃，置暗培养条件下培养12-15天，直至鳞茎膨大，切面少量愈伤化；

(4)鳞茎分化：将步骤(3)得到的培养的鳞茎整块转入鳞茎分化培养基，该鳞茎分化培养基以Ms培养基为基本培养基，额外添加细胞分裂素6-BA1.0mg/L～2.0mg/L、生长素NAA0.5mg/L～1.0mg/L和病毒唑5.0mg/L～10.0mg/L，蔗糖40.0g/L，琼脂粉5.0g/L，调整pH值为5.8，培养温度22±1℃，置光照培养箱中，每天光照14h，光照强度1500Lx～2000Lx，培养40-50天，直至从膨大的鳞茎块周围分化出小的鳞茎球；

(5)继代增殖培养：切取步骤(4)诱导产生的小的鳞茎球，接种到鳞茎球增殖培养基上，该鳞茎球增殖培养基以Ms培养基为基本培养基，额外添加6-BA 0.5mg/L～1.0mg/L、NAA 0.1mg/L～0.5mg/L，蔗糖40g/L，琼脂粉5.0g/L，pH值为5.8，培养温度22±1℃，置光照培养箱中，每天光照14h，光照强度1500Lx～2000Lx，培养20-30天，直至部分小鳞茎球长出分蘖小苗，此时升高培养温度至24±1℃，继续培养15-20天，直至小鳞茎基部增殖出一簇一簇的小鳞茎球；