[发明专利]一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用。所述核酸组合包括两对Her2基因引物和两对内参引物。本发明通过使用两对引物和两对内参使用数字PCR方法对Her2基因进行检测，能够对Her2基因进行绝对定量，借助软件完全自动化的进行结果判读，分析速度快。使用两对引物有利于提高检测结果的准确性，特别是对于血液这种本身DNA含量较低的样品。同时使用两对内参引物，减少了假阴性和假阳性的可能。

技术领域

本发明属于分子诊断技术领域，特别是涉及一种用于检测HER2基因的核酸组合、试剂盒及应用。

背景技术

人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor recepctor-2，Her2)基因，定位于染色体17q21，编码相对分子质量为185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。该受体蛋白与Her2家族成员及其配体之间相互作用，通过细胞间的信号转导，调节细胞生长、分化和增殖。研究发现，大约25％-30％的浸润性乳腺癌和80％的胃癌患者均有Her2基因扩增或蛋白过表达。此外乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌等均有Her2过表达的发生。赫赛汀(Herceptin)是1998年首次获批的一种免疫治疗药物，能特异性的抑制具有Her2扩增的癌细胞的生长，使病人预后大大改善。因此，准确的检测Her2状态是有效治疗癌症的前提。

目前美国食品及药物管理局(FDA)批准用于Her2检测的方法有两种：检测Her2蛋白的免疫组织化学(IHC)法和检测Her2基因的荧光原位杂交(FISH)法。IHC是一种半定量方法，因其具有成本低、技术简单、便于操作等特点，成为目前病理学实验室检测Her2状态的首选方法。但IHC就容易受到组织影响、缺乏标准化，结果判断存在主观差异，造成不同实验室之间的检测结果可能存在差异。FISH检测具有较高的准确性、灵敏度和特异性，其结果在不同实验室间一致性较高，是目前Her2检测的金标准。但FISH检测耗时长、探针成本较为昂贵且需要经过专业培训的技术人员进行较为繁琐的操作，此外，有研究结果表明，17号染色体多体性可导致FISH结果假阴性。

目前的检测一般需要通过有创性组织活检，不易重复获取。研究表明，血液、唾液等样本中混有肿瘤细胞DNA，若要从这些低含量样本中检测肿瘤细胞DNA，需要一种灵敏度高、特异性强、简便易行、结果容易判读的方法，用于肿瘤患者的靶向指导用药及预后判断。数字PCR(digital PCR，dPCR)是近年来新出现的一种PCR技术。在原有PCR技术的基础上，该技术进行了大幅革新。该技术将传统PCR中的每一份反应体系均分到大量反应单元中，每个反应单元中不包含或包含一个到多个目的核酸序列，目的核酸序列的数量符合泊松分布，然后在每个反应单元中独立地进行PCR扩增，扩增结束后，检测每个反应单元的荧光信号，最终根据泊松分布和荧光信号阳性的反应单元占所有反应单元的比例来计算目的核酸序列的拷贝数。

与经典的荧光定量PCR相比，dPCR可对DNA或RNA分子采用绝对定量的方式进行分析，具有无可比拟的精确性，不再需要标准曲线。dPCR提供了独立互不干扰的极微小的反应微孔，能够使得模板分子真正成为以单一分子为模板开始，进行PCR扩增的过程，能够区分混样模板中的极低含量靶核酸分子。dPCR已经被用于癌症分子标志物的发现、传染病研究、基因组结构变异分析、基因表达分析等领域。

发明内容

本发明针对现有技术不足，提供了一种基于数字PCR的用于检测Her2基因的引物组合。

一种用于检测Her2基因的核酸组合，包括两对Her2基因引物和两对内参引物，其中，Her2基因引物序列：

Her2-1-F：5’-ACAACCAAGTGAGGCAGGTC-3’，

Her2-1-R：5’-GTATTGTTCAGCGGGTCTCC-3’；

Her2-2-F：5’-TCTTCCTCTCCCTACATCGG-3’，