[发明专利]一种实时监测5‑氟尿嘧啶血药浓度的时间分辨荧光检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学生物技术与分子诊断领域，具体地，涉及一种实时监测5- 氟尿嘧啶血药浓度的时间分辨荧光检测试剂盒。

背景技术

5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)是一种广谱、高效的治疗消化道和呼吸系统肿瘤的首选药，以5-FU为基础的联合用药也是结直肠癌术后的标准辅助治疗。虽然5-FU的疗效显著，但存在骨髓抑制，黏膜炎等毒副作用，限制了其临床应用。临床药物流行病学调查显示，其毒副作用存在明显的个体差异，这与其体内的分解代谢限速酶-二氢嘧啶脱氢酶(Dihydropyrimidinedehydrogenase,DPD) 不同的个体表达水平有关。剂量累积的毒性作用可能影响5-FU的药物代谢，研究表明，5-FU的药物浓度-时间曲线下面积(AUC)为:8.7±4.1h×mg/L；清除率 (CL)为:51.5±24.8L/h/m²；表观分布容积(Vd):18.0±15.2L/m²；半衰期 (t_1/2):0.26±0.19h；血药峰值(Cmax):21.0±14.9mg/L。血浆中稳态药物浓度在25～ 25,000ng/mL，个体差异大。大多数药物的疗效与该药到作用部位的浓度或相关受体浓度密切相关，而药物在受体部位的浓度直接与血药浓度有关，两者呈现平行关系，因此，血药浓度的测定可作为间接衡量药物在作用部位或受体浓度的指标。

大量研究表明，等同体重给药(mg/kg)或体表面积给药(mg/m²)下的稳态血药浓度在个体间存在显著差异，仅仅根据体表面积给药，大部分患者未能达到最优的药物暴露量。而基于的药物剂量选择，将稳态血药浓度维持在一定水平，能够使患者在疗效和毒性之间获得最佳平衡。因此，需要建立一套简便即时的血药监测方法来控制有效药物浓度。

临床上5-FU的血药监测手段主要有紫外检测-高效液相色谱法(UV-HPLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联用色谱(GC-MS)和液质联用色谱(LC-MS/MS) 以及紫外分光光度法。色谱质谱定量所需血清样本量大，且检测前须对样本前处理，操作复杂繁琐，检测时间长，不符合即时监测及难以推广应用。紫外分光光度法同样样品需求量大、灵敏度低、抗干扰能力差、专属性差，临床普及意义不大，已逐渐被淘汰。

发明内容

本发明为了克服现有技术的上述不足，提供一种实时监测5-氟尿嘧啶血药浓度的时间分辨荧光检测试剂盒。本发明需要对试剂盒所使用的原料进行制备与筛选，从而确定最佳原料，这一过程包括人工抗原的合成及偶联比的确定，多克隆抗体的制备，标记物和抗体的比例，包被抗体的浓度，标记物的稀释度，包被板的吸附性能和变异大小等。通过反复摸索和比对，确定了小分子人工抗原标记和纯化的最佳条件。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的。

一种实时监测5-氟尿嘧啶血药浓度的时间分辨荧光检测试剂盒，包括浓度为 0、10、50、100、750、1500ng/mL的校准品5-FU、校准品稀释液、铕标5-FUA-OVA、抗5-FU鼠源多克隆抗体、分析缓冲液、洗涤液、增强液、羊抗鼠IgG包被的反应板；所述铕标5-FUA-OVA中5-FUA-OVA与Eu³⁺标记物的质量比为5:1，所述 5-FUA-OVA中5-FUA与OVA的偶联质量比为10:1；所述抗5-FU鼠源多克隆抗体制备使用的抗原为5-FUA-KLH，所述5-FUA-KLH中5-FUA与KLH偶联摩尔比为20:1。

优选地，所述校准品稀释液为含有2mg/ml的BSA及0.1％NaN₃的 50mmol/L、pH 7.8的Tris-HCl缓冲液。

根据本发明一个优选的实施方案，包被反应板为按每孔0.5ug羊抗鼠IgG， 100ul包被缓冲液加入96孔透明微孔板，并封闭冻干制备而成。其中封闭液成分为50mM Tris-HCl，0.1％BSA、4％海藻糖、0.05％NaN₃，pH7.2。

优选地，所述分析缓冲液成分为50mM、pH 7.8的Tris-HCl，1.5％PEG6000， 0.2％BSA，0.1％Proclin300，0.02％牛IgG，0.1％Tween 20和0.84％NaCl。

优选地，所述洗涤液成分为1.25mmol/L pH 7.8Tris-HCl，2.5％Tween 20和 21％NaCl。