[发明专利]用于检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的核酸、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了本发明提供了一组用于快速检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的核酸，同时建立了一种比较高效、灵敏的AGTR1基因的A1166C多态性位点的检测试剂盒及快速检测方法。其检测试剂盒，使用方便，操作简便，自动化程度高，大大简化了操作过程，并减少了在操作过程的污染，检测效果好，具有高灵敏度、高特异性、高准确度、高精确度的特点。提供的检测方法采用完全闭管操作，操作简单、方便快捷、通过直接探测PCR过程中荧光信号值的获得检测的结果，不需要PCR后处理或电泳检测，克服了常规PCR技术的易污染、出现假阳性，能有效避免非特异性扩增难题，并且适合大批量样本的检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的核酸、试剂盒及方法。

背景技术

原发性高血压(Essential Hypertension，EH)是危害人类健康的最常见疾病之一，是遗传和环境因素相互作用的多基因疾病。大量研究发现肾素-血管紧张素系统(Rennin-Angiotensin System，RAS)在EH的发生发展中起到了重要作用。血管紧张素Ⅱ(AngiotenssinⅡ，AngⅡ)是RAS系统中最主要的缩血管活性物质，它可以作用于外周血管，使静脉收缩，回心血量增加，最终导致高血压的发生。AngⅡ有两个最主要受体亚型，血管紧张素Ⅱ受体亚型1和亚型2(AngiotensinⅡType 1/2Receptor，AGTR1/AGTR2)。而AngⅡ的大部分生物作用，大多是通过与AGTR1结合后产生生物效应。

AGTR1主要分布在血管平滑肌上，AngⅡ与其结合使小动脉平滑肌收缩，外周阻力增加；醛固酮分泌增加，肾纳重吸收作用增强，导致水纳潴留。AGTR1基因位于3q22区，长60kb，包括4个外显子和3个内含子，为单拷贝基因。目前至少发现AGTR1有50个多态性位点，其中与临床较为密切的变异是，AGTR1基因3’端非编码区A1155C多态性位点，从而表现出AA、AC及CC 3种基因型，该位点虽不影响基因的开放阅读框架，但可以参与转录和翻译的调控，从而影响机体水钠平衡代谢、醛固酮的分泌和血管收缩。

沙坦类药物是临床广泛应用的一种血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，主要通过阻断AngⅡ与AGTR1受体结合产生降压作用。不仅能阻断ACE途径产生的血管紧张素Ⅱ，还可以阻断其他途径产生的血管紧张素Ⅱ，并且能够长效的阻断，从而达到更强更持久的降压，是临床医生为原发性高血压病人的一线用药。然而，沙坦类药物的药效受多种因素影响，其中，遗传因素是重要的因素。有关AGTR1基因多态性药物遗传学方面的研究很多，主要是针对A1166C多态性。研究发现AGTR1的A1166C位点多态性与坎地沙坦疗效有关，携带C等位基因的高血压病人应用坎地沙坦降压效率更好。另外有报道称患者服用缬沙坦后，携带AC基因型降压疗效优于AA基因型。也有研究发现携带AA基因型的患者服用替米沙坦治疗3个月后，血压下降值明显大于AC+CC基因型的患者。因此研究AGTR1的A1166C位点多态性对沙坦类药物的用药指导具有重大的临床意义。

目前，检测基因多态性和基因突变的方法主要有Sanger测序法；基因芯片杂交法，PCR-RFLP法和Taqman探针法等。Sanger测序法是突变分析的金标准，能发现已知和未知突变位点，但仪器昂贵，灵敏度低，操作复杂，周期长，容易污染；普通PCR-RFLP方法技术简便，价格便宜，适宜少量样本的实验室检测，但仅能检测有酶切位点的突变，无酶切位点不能检测，存在由PCR产物污染导致假阳性的风险；基因芯片技术具有高通量、微型化、自动化等特点，适用于全基因组突变扫描，不适宜单个基因的突变位点检测，且精度低，价格昂贵。这些缺点限制了这三种方法在实际临床工作中的发展和应用，无法满足快速指导临床评估要求。因此，一种快速、准确且低成本的新型检测方法成为了临床检查的迫切需求。

发明内容

为克服现有检测技术的不足，本发明的目的是提供一组用于检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的核酸。本发明的另一个目的是提供一种用于检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的试剂盒及其检测方法。