[发明专利]一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒

说明书

一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，属免疫学检测领域，所述试剂盒包含化学发光免疫反应板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液，其特征在于：所述化学发光免疫反应板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，每孔内底部联合包被3ABC和2C融合蛋白；所述酶标抗体为HRP‑兔抗猪lgG抗体；所述血清稀释液包含Tween‑20、牛血清白蛋白和大肠杆菌裂解液；所述化学发光底物为鲁米诺和牛血清白蛋白；所述化学发光增强剂含有IPP、H₂O₂和Tween‑20。本发明所述试剂盒，相对于只包被3ABC抗体的CLIA和市售常用的ELISA试剂盒相比，具有较高的敏感性、特异性和诊断能力，重复性与稳定性也较好。

技术领域

本发明属于免疫学检测领域，具体地涉及一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、烈性传染病。口蹄疫病毒属于核糖核酸科，口蹄疫病毒属。它包括一个单链正义RNA，该RNA首先转录翻译成一个大的多聚蛋白，然后在蛋白酶的作用下被切割成四个结构蛋白（SP）（VP1、VP2、VP3 、VP4）和10个非结构蛋白(NSP)（L、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D、3AB、3ABC）。其中四个结构蛋白组成病毒的衣壳，而非结构蛋白对于口蹄疫病毒的复制是必不可少的。

防控口蹄疫主要实施疫苗普遍免疫、扑杀、血清监测的形式。有效的血清监测对于防控口蹄疫的爆发至关重要。而区分疫苗免疫动物与口蹄疫感染动物（DIVA）对于监测口蹄疫是非常重要的。目前已经建立了许多关于口蹄疫的DIVA方法，例如病毒分离实验、病毒中和实验、实时定量PCR、分泌液 IgA ELISA 和基于NSP的ELISA。其中NSP ELISA由于具有高的敏感性和特异性而被普遍应用。市场上已经有许多检测3ABC、2C、 3AB、 2B等的商品化ELISA试剂盒，但这些ELISA方法敏感性与重复性差，常常不能满足临床检测的需求，尤其是对于那些已经免疫后的又感染口蹄疫病毒的动物。这些动物体内由于具有中和抗体使得口蹄疫病毒的复制很慢，导致体内具有很低浓度的非结构蛋白，因此用当前这种ELISA方法很难检测到。在各种非结构蛋白中，由于3ABC蛋白抗体具有很高的丰度以及它在体内较其它结构蛋白抗体持续时间长，而被目前普遍认为是最重要的感染口蹄疫的指标，但是3ABC抗体的产生时间和应答水平存在个体差异，已有研究表明，猪对口蹄疫病毒不如其他动物敏感，有时在接种口蹄疫病毒的猪机体内并不能检测到3ABC抗体或3ABC抗体产生的时间延迟，所以，以单独包被3ABC融合蛋白的试剂盒检测猪口蹄疫病毒，其结果会出现假阴性，准确性不高。2C蛋白是一个膜蛋白，它在纯化额灭活疫苗中是不存在的。此外，2C蛋白的抗体出现较早，被广泛用于检测口蹄疫的早期感染。由于动物感染口蹄疫后再不同时期会出现不同的非结构蛋白抗体，因此检测单一的非结构蛋白抗体是不准确的。所以对于诊断猪口蹄疫来说，至少应该检测一种以上的非结构蛋白。

化学发光免疫分析技术（CLIA）是在放射性免疫和酶联免疫分析的基础上逐渐发展建立的。化学发光不需要背景荧光，所有的能量都来自于化学反应，因此消除了背景荧光，可以在很宽的线性范围内检测极低浓度的分析物。当前CLIA在人医诊断中已经较为普遍应用，例如检测艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、检测肿瘤标记物等等。当前关于猪口蹄疫诊断的化学发光免疫分析方法还未见报道。

发明内容

针对口蹄疫病毒检测所面临的问题，本发明拟提供一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，该试剂盒相对于市场上常用的试剂盒产品，敏感性更高，特异性更强，诊断能力亦优于其他市售产品。

一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，所述检测试剂盒包含化学发光免疫反应板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液；所述化学发光免疫反应板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，每孔内底部联合包被3ABC和2C融合蛋白；