[发明专利]猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex及其构建方法和应用

说明书

本发明提供猪链球菌2型Rex基因敲除突变株及其构建方法和应用，属于基因工程领域。突变株SS2‑1ΔRex，是将SS2‑1株基因组中Rex编码基因敲除后获得的。突变株SS2‑1ΔRex的构建方法：构建含有同源重组片段的基因敲除质粒 pSET4s::Rex，将 pSET4s::Rex电转化入SS2‑1株内，同源重组，采用抗性筛选；所述同源重组片段的两侧为SS2‑1株基因组中Rex编码基因上、下游片段，中间为抗性基因片段。突变株SS2‑1ΔRex，毒力较亲本株显著降低，构建方法简单、高效，突变株SS2‑1ΔRex的活疫苗，仅需接种两次，就能够有效控制SS2的感染，没有明显的毒副反应。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex及其构建方法和应用。

背景技术

猪链球菌是一种重要的人畜共患病原菌，主要引起仔猪败血症和脑膜炎等，给全球养猪业造成巨大的经济损失。近年来，猪链球菌临床分离株表现出对人类和猪更严重的致病性，导致人们担心毒力更强的猪链球菌的出现。在已知的33个血清型中，以猪链球菌2型(Streptococcus suissero type 2, SS2)流行最广，致病性最强，危害最重。猪链球菌通常定居在感染猪的上呼吸道、扁桃体、鼻腔以及肠道。1998年和2005年在我国江苏南通和四川资阳两次暴发了由猪链球菌2型引起的猪链球菌感染疫情，给公共卫生安全造成了极大的危害，受到全世界的广泛关注。但是，目前关于S.suis感染宿主并致病的分子机制尚不明确。

疫苗作为一种安全有效的病原菌防控手段成为当今应对SS2感染的研究热点。现有灭活疫苗，需多次接种、接种剂量大、接种后易产生局部或全身毒、副反应，且保护作用欠佳。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex，毒力较亲本株显著降低。

本发明的另一目的是提供猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex的构建方法，该方法简单、高效。

本发明的再一目的是提供猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex在制备猪链球菌病疫苗中的应用，采用突变株SS2-1ΔRex的活疫苗，仅需接种两次，就能够有效控制SS2的感染，没有明显的毒副反应。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex，是将猪链球菌2型SS2-1株基因组中Rex编码基因敲除后获得的，所述Rex编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

在本发明中，所述Rex编码基因是通过同源重组方法敲除、且被抗性基因替代了。

在本发明中，所述抗性基因为氯霉素抗性基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供所述猪链球菌2型Rex基因敲除突变株SS2-1ΔRex的构建方法，包括如下步骤：构建含有同源重组片段的基因敲除质粒 pSET4s::Rex，将所述基因敲除质粒pSET4s::Rex电转化入猪链球菌2型SS2-1株内，同源重组，采用抗性筛选；所述同源重组片段的两侧为猪链球菌2型SS2-1株基因组中Rex编码基因上、下游片段，中间为抗性基因片段。

优选的技术方案中，构建含有同源重组片段的基因敲除质粒 pSET4s::Rex的方法包括如下步骤：

（1）以猪链球菌2型SS2-1株基因组DNA为模板，分别扩增Rex编码基因上、下游片段；以pSET3为模板，扩增氯霉素抗性基因片段；