[发明专利]一种动物源食品中99种兽药残留的高通量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽药残留检测方法，尤其是涉及一种动物源食品中99种兽药残留的高通量检测方法。

背景技术

兽药的种类很多，残留毒理学意义较大的兽药按其用途可以分类主要包括：抗生素类、合成抗菌素类、抗寄生虫类、生长促进剂和杀虫剂等。根据联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)兽药残留联合立法委员会的定义，兽药残留(veterinary drug residues)是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及其代谢物，以及与兽药有关的杂质。[1]由于兽药残留的对人体的危害极大，因此动物源性食品中的兽药残留是世界各国食品安全检测的重要指标，我国政府也制定了一系列法律法规和技术标准限制兽药残留的超标。

然而，综观近年来中国畜牧业的发展，由于养殖条件的差异和利益驱使等因素的影响，兽药残留超标现象时有发生。据报道，我国每年食品中毒人数高达2万～4万人，而专家估计这个数字尚不到实际发生数的1/10。2009年，广州市民食用含“瘦肉精”猪肝70多人食物中毒。刘军等对135份鲜牛乳中的四环素类抗生素残留进行了检测，金霉素、土霉素、四环素残留的检出率分别为8％、18％、14％；张莉等对哈尔滨市市售鸡肉、鸡肝中的土霉素残留进行了检测，阳性率分别为64％，80％。另外，动物源性食品中激素类药物残留的情况也非常普遍，郭子侠等对北京市售的动物鞭、胎盘、蛇、甲鱼等动物原料生产的保健食品进行了检测，检出率分别为32.6％，47.8％，32.6％和15.2％；还对牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉、鸡蛋、鱼、牛奶等七类动物性食品中的雌二醇、雌三醇、雌酮、孕酮、睾酮类5种性激素进行了调查，结果显示7类上述食品的激素检出率均超过20％。2012年，肯德基供应商-六和集团被曝光对原料鸡养殖过程中所用抗生素种类达18种，其中很多抗生素停药期不停用；此外还有一些养鸡场在使用国家禁用的地塞米松激素类药物。

这些事件的屡有发生对兽药残留检测技术提出了更高的要求。目前，我国可以用于兽药残留检测的国家标准多达数十个，但大多是按照兽药类别建立的仅仅适用于某一种动物源性食品中某一类兽药残留的分析方法。这些方法的样品前处理过程各异，耗时较长，检测项目覆盖范围小，无法满足多残留筛查的需求。因此，研究建立动物源性食品中多种类兽药残留高通量筛查技术对于有效提高监管工作效率，保障我国人民的食品安全具有非常重要的意义。

兽药残留分析方法包括了样品前处理技术和仪器分析技术。由于兽药残留水平很低，样品基质复杂、干扰物质多，不易进行分离、纯化，因此样品前处理是整个兽药残留分析检测过程中耗时最长、劳动强度最大、同时也是产生误差最多的一个环节。常见的兽药残留样品前处理技术有固相萃取、固相微萃取、基质分散固相萃取、免疫亲和色谱技术、分子印迹技术、超临界流体萃取、加速溶剂萃取等，这些前处理方法在兽药残留分析中的应用各有其特点,但都存在有选择性限制的缺点，样品处理通量也不够高。为了能够同时分析检测不同物理和化学性质的多种兽药残留，需要发展非选择性的高通量样品制备方法。

QuEChERS(quick，easy，cheap，effective，rugged，safe)法因其具有快速、简单、便宜、有效、耐用和安全可靠等特点而得名，在农药多残留检测中得到了广泛的应用。随着应用推广的不断展开，QuEChERS法在兽药残留检测方面的应用也日趋增多。牛乳、鸡蛋、肝脏、肌肉组织中的磺胺类、喹诺酮类、苯并咪唑类、阿维菌素类等兽药残留的QuEChERS检测方法均有报道。尽管目前QuEChERS法在兽药残留高通量分析检测方面已经有了较多的应用，但已有的研究表明应用QuEChERS方法在测定例如青霉素类、四环素类、喹诺酮类等极性较强的兽药时，存在着回收率低，无法满足残留分析要求的不足。

载体辅助液液萃取(Supported Liquid-Liquid Extraction，SLLE)是一项重要的样品前处理技术，它以硅藻土等为固体载体，保留吸附含水提取溶液中的待测化合物，再以与其不相容的有机溶剂洗脱达到样品提取、净化、浓缩的目的，在农药残留、药物分析等领域有着广泛的应用。与传统液液萃取相比，SLLE无需借助分液漏斗及大量有机溶剂多次提取待测组分，操作步骤简单、溶剂用量小、不易发生乳化、重现性好等优点。