[发明专利]一种滇黄精的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种滇黄精的组培快繁方法。

背景技术

黄精为百合科多年生草本植物黄精、滇黄精或多花黄精的根茎，具有润肺滋阴、补中益气、益肾增精的作用。近代研究表明，黄精含有烟酸、醒类、豁液质、淀粉、二氨基丁酸、黄精多糖及低聚糖等成分，有麻醉及降低动物血压的作用，对肾上腺素引起的血糖过高有抑制作用，对改善肾功能也有较好功效。黄精还是一味抗菌良药，对伤寒杆菌、结核杆菌、金黄色葡萄球菌及皮肤癣菌等均有一定抑制作用。近年来，黄精已广泛用于冠心病、高血压、糖尿病、肺结核、再生障碍贫血、以及预防放疗、化疗引起的副作用等。由此可见，黄精的市场应用前景广阔，然而随着市场需求量的不断增加和野生资源的不断减少，黄精的人工栽培已成为市场供求的主体。目前，黄精的繁殖方式主要有性（种子）繁殖和无性（根茎）繁殖两种方式。由于黄精种子难收集，种子发芽率低，而且种子繁殖时间长。不利于黄精的人工大面积种植，所以在当前黄精的人工栽培中，繁殖主要依靠根茎的无性繁殖，该方法繁殖系数低、根茎的用量大，既不经济，又限制了黄精的产量潜力，不便于栽培管理推广。因此，研制开发一种成本低、繁殖系数高、繁殖速度快、技术稳定、可在短时间内提供大量优质黄精种苗的滇黄精的组培快繁方法是客观需要的。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种成本低、繁殖系数高、繁殖速度快、技术稳定、可在短时间内提供大量优质黄精种苗的滇黄精的组培快繁方法。

本发明的目的是这样实现的，一种滇黄精的组培快繁方法，包括以下几个步骤：

①外殖体的选择与处理:选取成熟、新鲜、无病虫害的滇黄精根茎，用刀切取带芽的根茎置于洗洁精水溶液中浸泡，浸泡1～3min后将其用流水清洗干净，然后用体积分数为70～75%的酒精浸泡1～2min，用无菌水反复冲洗2～3次，最后放入质量分数为0.1～0.3%的氯化汞中反复浸泡灭菌3～5次，每次浸泡的时间为3～5min，每次浸泡后须用无菌水冲洗2～3次,冲洗干净后再用无菌滤纸将无菌水吸干，用刀切去伤口坏死的部分即可进行接种；

②诱导培养：将步骤①中消毒处理后的根茎接种于诱导培养基上进行诱导培养，在培养温度为23～28℃，光照强度为2000～2500Lux，光照时间为12～16h/天的条件下培养，培养20～30天后根茎部分膨大，根茎的切口处诱导出淡黄色致密的愈伤组织，所述诱导培养基为：MS基本培养基+1.0～3.0mg/L6-BA+0.5～1.0mg/L2,4-D+1.0～2.0mg/L赤霉素+5.0～10.0g/L琼脂+20.0～30.0g/L蔗糖；

③继代培养：先将步骤②中诱导出的愈伤组织转接于继代培养基中进行继代培养，在培养温度为23～28℃，光照强度为2000～2500Lux，光照时间为12～16h/天的条件下培养，培养20～30天分化出新的幼芽；所述继代培养基为：MS培养基+3.0～4.5mg/L6-BA+2.0～3.0mg/L62BA +3.0～5.0mg/L玉米素+0.2～1.0mg/LNAA+1.0～3.0g/L琼脂+5.0～10.0g/L蔗糖；

④增殖培养：将步骤③中继代培养成功的带有幼芽的根茎切成0.4～0.8cm³的小块，然后接种于增殖培养基中，在培养温度为23～28℃，光照强度为2000～2500Lux，光照时间为12～16h/天的条件下培养20～30天后获得分化苗；所述增殖培养基为：MS培养基+2.0～4.0mg/L6-BA+0.5～1.5mg/L2,4D+0.5～1.0 mg/L GA₃ +6.0～8.0g/L琼脂+20.0～25.0g/L蔗糖；

⑤生根培养：待步骤④中增殖培养得到的分化苗长至2～4cm时，先将分化苗转接到生根培养基上诱导生根，在培养温度为23～28℃，光照强度为2000～2500Lux，光照时间为12～16h/天的条件下培养20～30天后可观察到分化苗长出3～6条根须，根须长度为2～4cm，然后将分化苗移至自然光下培养，培养10天后即可进行组培苗的移栽，所生根培养基为：1/2MS培养基 +0.2～1.0mg/LNAA +0.2～0.6mg/LIBA+0.2～0.5%活性炭+5～20%香蕉 +6.0～8.0g/L琼脂+20.0～25.0g/L蔗糖；