[发明专利]一种11α-羟基-4-烯-3,17-雄甾二酮的生产方法

权利要求书

1.一种11α-羟基-4-烯-3,17-雄甾二酮的生产方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:

( 1) .收集所需菌种的孢子并进行种子培养：

( 1.1) 孢子茄形瓶生产

将保存的赭曲霉Aspergillus ochraceus ATCC18500的种子接种到固体斜面培养基上，放置于28℃的培养箱中，培养7-10天后，斜面表层孢子为灰白色，斜面背面为暗红色有褶皱；然后，放到4度冷藏备用；

所述固体斜面培养基包括以下组分：

葡萄糖20g/L，蛋白胨1.0g/L，麦芽提取物20g/L，琼脂粉20g/L，消毒前pH调节到5.5-6.0；

( 1.2) 一级种子罐

将步骤1的孢子铲到无菌水中，然后接种于一级种子罐中培养；接种后，所述一级种子罐的转速为50-100rpm，通气比为0.3-0.6，培养周期为35-40小时；

其中，所述一级种子罐为500L体积；

所述培养基包括以下组分：葡萄糖6g/L，酵母粉15g/L，硝酸钠5.4g/L，磷酸氢二铵0.6g/L，消毒前调节pH7.5-8.0，121℃-125℃消毒30-40分钟；

( 1.3) 二级种子罐

当一级种子罐的菌浓达到3％时，将一级种子罐中的培养液移入二级种子罐，二级种子罐接种量为10-20v/v％；移完后，所述二级种子罐转速30-50rpm，通气比为0.3-0.6，周期20-25h；二级种子罐规格为3吨，培养基组分为葡萄糖6g/L，酵母粉15g/L，硝酸钠5.4g/L，磷酸氢二铵0.6g/L，消毒前调节pH7.5-8.0，121℃-125℃消毒30-40分钟；

( 2) .将步骤1得到的种子置于转化培养基中发酵培养；

当二级种子罐菌浓达到5％时移入转化罐中，接种量为10-20v/v％,转化罐规格为15吨；

移完种子后，转化罐的初始转速为30rpm，风量为200m³/h，罐压为0.05MPa，标定溶氧电极为100％，培养温度为28℃；

随着种子的生长，转化罐中溶氧逐渐降低，保持风量不变逐渐提高转速使溶氧保持在20-30％，种子生长大约20-25h，发酵液中葡萄糖降低到5g/L以下时准备进行第一次补料；

( 3) .将底物粉碎并使用50v/v％的乙醇水溶液打浆为膏体；

在1吨补料罐中投入150L乙醇和150L无菌水，搅拌均匀后投入200kg底物4-烯-3,17-雄甾二酮，夹套升温到30-35℃，继续搅拌使混合均匀；

底物使用前经过气流粉碎机粉碎，粒度在10-20μm；

( 4) .底物转化

将混合好的底物缓慢补入转化罐中，每次补充底物的量为转化罐中发酵液体积的2v/v％，控制补充底物的速度，将补充底物的时间控制在4-5小时；

此时通过另外补充底物罐补入葡萄糖，使整个发酵过程中葡萄糖浓度在1-5g/L；

第一次补充底物后每隔4-8小时HPLC检测转化进程，当转化率达到60-70％准备进行第二次；

( 5) .成品提取。