[发明专利]一种两面针再生苗的组培培养基和培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养技术领域，更具体地，涉及一种两面针再生苗的组培培养基和培养方法。

背景技术

两面针（Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.）为芸香科花椒属植物，具有很高的药用价值，其干燥根入药，为我国南方地区常见中药，1977年开始被收入《中国药典》。两面针具有行气止痛、活血化瘀、祛风通络之功效。其中的氯化两面针碱可以抗肝癌和乳腺癌；两面针还是牙膏工业的原料。两面针分布于我国南方各省，生于山野坡地灌木丛中。两面针分布虽然广阔，但资源并不丰富。由于两面针用量巨大，其野生资源几近枯竭，市场上两面针药材的伪品因此也较多。恢复两面针的资源首先需要种苗。可以通过种子萌发、扦插繁殖和组织培养获得种苗。组织培养的研究集中在两面针的快速繁殖，即采用带腋芽的茎段为外植体，通过丛生芽的诱导来实现增殖，但这些方法的繁殖系数较低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种两面针再生苗的组培培养基。

本发明的第二个目的是提供一种两面针再生苗的组培方法。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

6-糠基氨基嘌呤在两面针组织培养中的应用，所述6-糠基氨基嘌呤在培养基中的浓度为0.2～6 mg/L。

发明人研究发现在两面针中加入6-糠基氨基嘌呤（又名激动素，简称KT）可诱导出两面针愈伤组织，利用愈伤组织进行组织培养，可提高增殖系数，实现快速繁殖。

发明人研究发现，两面针组织培养较为复杂，外植体在诱导长成愈伤组织后，不同生长阶段所需的生长物质的种类和含量显著不同，因此本发明提供了一套从愈伤组织诱导到生根的培养基，即提供一种两面针再生苗的组培培养基，包括愈伤组织诱导培养基、芽分化培养基、芽增殖培养基和生根培养基；所述愈伤组织诱导培养基为MS+1.0～4.0 mg/L KT＋1.0～2.0 mg/LNAA；所述芽分化培养基分为第一次芽分化培养基和第二次芽分化培养基，所述第一次芽分化培养基为MS＋1.0～4.0 mg/L KT＋0.1～0.2 mg/L IBA，所述第二次芽分化培养基为MS＋2.0～6.0 mg/L KT＋0.2 mg/L IBA或者MS＋2.0～6.0 mg/L KT＋0.4～0.8 mg/L NAA；所述芽增殖培养基为MS＋2.0～4.0 mg/L KT＋0.8 mg/L IBA或者MS＋2.0～4.0 mg/L KT＋0.4～0.8 mg/L NAA；所述生根培养基为1/2MS＋0.2～2.0 mg/L KT＋1.0 mg/L IBA。

优选地，所述愈伤组织诱导培养基为MS+4.0 mg/L KT＋2.0 mg/LNAA；所述芽分化培养基为MS+6.0 mg/L KT＋0.2 mg/L IBA；所述芽增殖培养基为MS＋4.0 mg/L KT＋0.8 mg/L NAA；所述生根培养基为1/2 MS＋0.2 mg/L KT＋1.0 mg/L IBA。

本发明还提供一种两面针组织培养的方法，包括以下步骤：

（1）以两面针无根苗的茎段为外植体，进行愈伤组织的诱导；所述愈伤组织诱导培养基为MS+1.0～4.0 mg/L KT＋1.0～2.0 mg/LNAA；

（2）将愈伤组织在分化培养基中分两次进行分化培养，以得到带芽愈伤组织；所述第一次芽分化培养基为MS＋1.0～4.0 mg/L KT＋0.1～0.2 mg/L IBA，所述第二次芽分化培养基为MS＋2.0～6.0 mg/L KT＋0.2 mg/L IBA或者MS＋2.0～6.0 mg/L KT＋0.4～0.8 mg/L NAA；

（3）将带芽的愈伤组织在芽增殖培养基中培养，以获得更多的再生芽，并改善芽的质量；所述芽增殖培养基为MS＋2.0～4.0 mg/L KT＋0.8 mg/L IBA或者MS＋2.0～4.0 mg/L KT＋0.4～0.8 mg/L NAA；

（4）将所得芽从基部切下，转接到生根培养基中诱导生根；所述生根培养基为1/2 MS＋0.2～2.0 mg/L KT＋1.0 mg/L IBA。

优选地，步骤（1）、（2）、（3）、（4）的培养条件均为：温度23～27℃，相对湿度40%～60%，光照强度为32.5～34.5 μmol·m^-2·s^-1，光周期为光照与黑暗时间各半。