[发明专利]一种RGD靶向微泡造影剂

说明书

一种RGD靶向微泡造影剂，以“生物素‑亲和素”体系制备出RGD靶向微泡造影剂，分为10μg/ml RGD肽封闭组和30μg/ml RGD肽封闭组。测得的RGD靶向微泡粒径为（4.09±0.07）μm。黏附在单个细胞表面的微泡数量分别降低54.64%和67.00%。在剪切应力1.5 dyne/cm2下，RGD靶向微泡在细胞表面黏附率随着剪切应力增大而增加（P<0.05）。当剪切应力1.5 dyne/cm2时，RGD靶向微泡在细胞表面黏附率为（48.72±4.26）个，继续增大剪切应力，黏附率降低（P<0.05）。RGD靶向微泡造影剂能特异性地黏附血管内皮细胞，有望作为超声分子探针检测评价整合素在肿瘤血管新生中的表达，用于肿瘤的早期诊断及预后检测。

技术领域

本发明涉及一种造影剂，尤其涉及一种RGD靶向微泡造影剂。

背景技术

血管新生是在原有的血管基础上长出新的毛细血管，存在于组织生长发育和修复过程，在肿瘤生长和新陈代谢中发挥重要作用。肿瘤血管新生标志物整合素ανβ3受体在肿瘤组织新生血管内皮细胞膜和大多数肿瘤细胞表面均呈高表达，但在成熟的血管内皮细胞中几乎不表达。

同时，含有RGD（Arg-Gly-Asp）序列的细胞外基质蛋白能与整合素ανβ3受体结合，在肿瘤血管生成中起着重要作用。配体结合到超声微泡造影剂表面，用于检测肿瘤血管新生标志物整合素ανβ3表达。Ellegala等将整合素ανβ3抗体连接到微泡表面，并在荷瘤鼠模型中实现靶向显像。此外，RGD序列对激活的血小板上表达GPIIB/IIIa具有极强的亲和力，使早期发现动脉血栓成为可能。

发明内容

本发明的目的是为了解决肿瘤血管新生超分子成像问题，设计了一种RGD靶向微泡造影剂。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

RGD靶向微泡造影剂的制备原料：二硬脂酰磷脂酰胆碱（DSPC）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）、DSPEPEG2000-Biotins；亲和素（Streptavidinfromeggwhite）；c[RGDfk]Biotin和RGD多肽（CCRGDKGDPC-NH2），纯度&gt;98%。

RGD靶向微泡造影剂的制备方法：DSPC、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-Biotins（摩尔比90∶5∶5）溶解于1ml氯仿中，混匀。室温通入氮气吹干，抽真空4h，完全除尽残余氯仿。加入pH7.4的缓冲液5ml（Tris、甘油、1,2-丙二醇体积比为8∶1∶1）。置于60℃水浴超声清洗仪内超声10min，得到透明的脂质体溶液。西林瓶分装5瓶，加盖密封，抽真空15min，C3F8气体置换。高频振荡仪机械振荡45s，即完成生物素化微泡造影剂的制备。将制备好的生物素化微泡造影剂以400g/min离心4min，用PBS缓冲液洗涤，重复3次。抗生蛋白链菌素（Streptavidin）按每1×107个微泡加入3μg，室温孵育15min，离心洗涤2次。c[RGDfk]Biotin按1×107个微泡加入7.5μg，室温孵育15min，离心洗涤2次，即完成RGD靶向微泡造影剂的制备。

所述的靶向微泡造影剂是将抗体、多肽等特异性配体连接到微泡造影剂表面，使其能主动结合到靶组织或靶器官上相应的受体，产生特异性靶向显影。

所述的多肽小分子化学稳定性较好、免疫原性低。

本发明的有益效果是：

RGD靶向微泡造影剂能特异性地黏附血管内皮细胞，有望作为超声分子探针检测评价整合素ανβ3在肿瘤血管新生中的表达，用于肿瘤的早期诊断及预后检测。

具体实施方式

实施案例1：