[发明专利]快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法

权利要求书

1.一种快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)种子萌发

A、制作棉花培养基

将棉花用清水洗净，拧干后放置于溶液a中浸泡30min，其中所述溶液a由1L水中加入7g魔芋粉和25g蔗糖混合而成，然后将浸泡好的棉花放入培养瓶中，并将培养瓶置于冰箱中冰冻30min；再将无纺布洗净，并浸泡于水中，10min后将无纺布覆盖在培养瓶中棉花的上表面，拧紧瓶盖，放入灭菌锅内灭菌，灭菌条件为115℃，30min，备用，其中，所述无纺布上设置有彼此均匀间隔的孔径为1cm的圆孔，相邻两个圆孔间距为0.4cm；

B、消毒处理

首先将马尾松种子置于质量分数为0.4％的硫酸铜溶液中，超声波处理；然后依次用质量分数为75％酒精淋洗1min，质量分数为0.05％HgCl₂溶液淋洗10min；最后用质量分数为3％NaClO溶液浸泡20min，并用清水冲洗干净，备用；

在培养室中将消毒处理好的马尾松种子接种到棉花培养基中，每个无纺布的圆孔接种1粒种子，进行种子萌发，得到马尾松无菌芽Z；

2)切下长度为4～6cm的马尾松无菌芽Z的顶芽，作为外植体，置于培养基b中进行培养，得到马尾松丛生芽；其中所述培养基b由每1LMS培养基中加入3mg 6-BA、0.2mg NAA、50g马铃薯和20g蔗糖混合而成；

3)切下伸长至4～6cm长的马尾松丛生芽的顶芽或者嫩茎，种植于培养基c中进行伸长培养后，得伸长芽；切下长度4～6cm的伸长芽的顶芽或者嫩茎接种到培养基d中进行增殖，获得继代芽；

其中所述培养基c由每1LMS培养基中加入20mg荧光粉、0.5mg NAA、3000mg蔗糖和7000mg琼脂混合而成；所述培养基d由每1LMS培养基中加入20mg荧光粉、1mg 2，4-D、1mg 6-BA、1mg KT、0.3mg NAA、3g蔗糖和7g琼脂混合而成；

4)切下生长健壮、高3～4cm的继代芽，用液体培养基e浸泡25～35min，取出后用液体培养基f浸泡15～25min，移植于育苗器中，荧光照射处理，获得马尾松无性繁殖苗；

其中所述液体培养基e由每1LDCR培养基中加入75mgIBA和30mgNAA混合而成；液体培养基f由每1LGD培养基中加入0.4mgABT6和5g滑石粉混合而成；

其中所述荧光照射具体为：①将荧光粉装入透明塑料袋中，装满整个塑料袋，并封口；其中塑料袋为长5～10cm，宽2～4cm的长方形结构；②将塑料袋黏贴在育苗器外侧，塑料袋下边缘与育苗器内生根基质上表面边缘齐平；

5)移栽苗圃：将生长良好的马尾松无性繁殖苗移栽到苗圃。

2.如权利要求1所述的快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，其特征在于，还包括：步骤1)中所述溶液a的配置方法：首先将蔗糖与水先溶解均匀，再加入魔芋粉，待魔芋粉吸水膨胀完全。

3.如权利要求1所述的快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，其特征在于，还包括：步骤1)中所述棉花平铺在培养瓶的瓶底，厚度为1.8～3.0cm。

4.如权利要求1所述的快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，其特征在于，还包括：步骤1)中所述超声波处理的方法为：先用频率为40KHz超声波处理20min，静置10min，再用频率为80KHz超声波处理20min，静置10min，最后用频率为40KHz超声波处理20min。

5.如权利要求1所述的快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，其特征在于，还包括：步骤3)中所述培养基c和培养基d中的荧光粉是在其它原料混合均匀后，最后加入荧光粉。

6.如权利要求1所述的快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，其特征在于，还包括：步骤4)中所述育苗器中装有固体培养基，所述固体培养基包括河沙、蛭石、苔藓和红土以5:2:1:2的比例混合均匀后装填于育苗器中；在所述育苗器的培养基中淋入100g质量分数为2％的Ca(H₂PO₄)₂溶液和100g质量分数为1％的尿素溶液。