[发明专利]一种用于表征鲳鲹巨噬细胞吞噬微生物的系统

说明书

本发明公开了一种用于表征鲳鲹巨噬细胞吞噬微生物的系统，通过手术刀和镊子对鲳鲹进行解剖并分离得到其头肾，通过细胞筛摩擦头肾得到含巨噬细胞的细胞悬液，通过Percoll溶液密度梯度离心管，得到头肾的巨噬细胞。通过台盼蓝染色手段对其体外培养的细胞存活数量进行计数，并且检测其一周内的存活状况。通过该系统进行吞噬实验，测定卵形鲳鯵头肾巨噬细胞对鰤鱼诺卡氏菌和酵母等的吞噬情况，以观察其吞噬功能。通过使用该系统的实验结果可以发现，本发明能够良好地提取鲳鲹巨噬细胞，并能够良好地观察鲳鲹巨噬细胞的存活情况与吞噬情况。本发明为进一步研究鲳鲹巨噬细胞的生理学、病理学、毒理学奠定了基础。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及表征免疫细胞与微生物相互作用的系统，具体涉及一种用于表征鲳鲹巨噬细胞吞噬微生物的系统。

背景技术

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)(Linnaeus)，俗称金鲳，黄腊鲳，属硬骨鱼纲，脊椎动物门，硬骨鱼纲，鲈形目，鲹科，鲳鲹属。卵形鲳鲹体型侧扁，卵圆形，体型大，生长快，抗病力强。自然水域中卵形鲳鲹喜卵形鲳鱼集群觅食洄游，争抢食物凶猛，主要以小型软体动物、小型螺类为食。大的个体有5-10kg，肉细嫩，味鲜美，为名贵的食用鱼类。

卵形鲳鲹是一种抗病力较强的海水鱼类，过去关于其病害方面的报道极少。但随着工业化的发展，水产养殖业也越趋现代化，养殖规模不断扩大、养殖密度也逐渐增加，卵形鲳鲹疾病的发生率也不断增高，病毒性、细菌性等的疾病时常出现，其中近年来以诺卡氏菌病例最多。诺卡氏菌病的主要症状为病鱼体表有点状出血斑小而隆起的浓肿，有时口唇部糜烂本病的典型症状是脾脏及肾脏上有白色结节的病变，另一种流行症状主要发生鳃，也叫鳃型诺卡氏菌症，可在鳃上见到直径为5mm的不规则结节，也有两种症状混合出现的。卵形鲳鲹诺卡氏菌病发病率达20％～60％，死亡率10％～30％，未死鱼由于体表溃疡症状也严重影响其市场价值。

鱼类诺卡氏菌病主要致病菌为鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolea)。鰤鱼诺卡氏菌在分类学上属放线菌目(Actinomycetales)，诺卡氏菌科(Nocardiaceae)，诺卡氏菌属(Nocardioides)。鰤鱼诺卡氏菌菌体形态为长杆、短杆或分支状；属于放线菌类生物，呈弱抗酸性，在培养基上生长迟缓。其菌落形态呈白色沙粒状，培养3-7天可转变为黄色沙粒状。

近年来水产动物病害进行免疫学角度的研究，对于病害防控和治疗以后的发展越来越重要，并且逐渐成为研究的热点。鱼类头肾是其重要的免疫器官，头肾的巨噬细胞是非特异性防御系统的重要的细胞。当受到病原生物的入侵时，巨噬细胞将被激活并吞噬病原体，并且发生一系列反应杀死病原生物。同时其免疫活性参数溶酶体活性、补体活性的都得到加强。

巨噬细胞的吞噬作用(phagocytosis)是指细胞把入侵的病原体(如细菌和病毒)转运到细胞内并加以清除的过程。此过程构成生物体先天免疫的第一道防线。吞噬作用是所有后生动物的一种原始的防御机制。

现今，在水产养殖方面，诺卡氏菌对鱼类的影响越来越严重，而相关的研究却还比较少，所以探讨鱼类本身对于诺卡氏菌等细菌的免疫，将有利于我们更好地了解卵形鲳鲹对于鰤鱼诺卡氏菌的免疫情况。从而有利于我们更好地研究出防控其病害影响的药物，同时也为其他鱼类巨噬细胞对于诺卡氏菌的病害防控的研究提供一个参考。促进卵形鲳鲹水产养殖业的发展，并且为水产养殖户提供一定的理论知识，帮助他们获得更好的收益。

有关卵形鲳鲹免疫功能的报道较少，头肾是鱼类的重要免疫器官，未见到卵形鲳鲹头肾巨噬细胞的分离、纯化、培养和表征的报道。

对卵形鲳鲹头肾巨噬细胞的分离、纯化、培养和表征为卵形鲳鲹巨噬细胞的生理学、病理学、毒理学等方面奠定基础，有利于更深入地研究卵形鲳鲹的免疫功能，有利于研究微生物-卵形鲳鲹的致病机理，有利于研究卵形鲳鲹对微生物等成分的吞噬作用，有利于对卵形鲳鲹病害的控制，为卵形鲳鲹巨噬细胞的分子生物学研究提供材料保障。

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