[发明专利]一种人Sec5蛋白的应用

说明书

本发明通过免疫共沉淀实验证明IP3R3型与人Sec5蛋白结合，并通过Pull down实验证明人Sec5蛋白‑2片段、人Sec5蛋白‑4片段与IP3R1的H1段有结合，而且证明了人Sec5‑2片段对RAW264.7细胞的吞噬功能有促进作用；在这基础上，本发明公开了人Sec5蛋白和人Sec5蛋白‑2片段在制备抗真菌感染的药物中的应用，且在抗感染药物领域有着良好的开发应用前景。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地说，是关于人Sec5蛋白的应用。

背景技术

随着发病率和死亡率的上升，侵袭性真菌感染逐渐受到人们的关注，ICU的感染患者中19％为真菌感染，其中白念珠菌占80％，排院内获得性血液感染的第4位。高等哺乳动物免疫系统分为固有免疫系统和适应性免疫系统，其中固有免疫系统在病菌侵入前期发挥着重要作用。固有免疫细胞(如巨噬细胞，树突状细胞)通过细胞表面的模式识别受体结合病原菌表面的病原相关分子模式，进而激活免疫细胞对入侵病原菌的杀伤。当免疫细胞表面的模式识别受体与病原菌表面的病原相关分子模式结合后，激活胞内信号传导，将病原菌包裹内吞形成吞噬小体，吞噬小体与胞内溶酶体融合后将病原菌杀伤，并体呈抗原，激活适应性免疫反应。

大量研究表明免疫细胞表面的模式识别受体(如toll样受体，C型凝集素受体，补体受体等)与相应的配体集合后激活胞内磷脂酶C(phospholipase C，PLC)，磷脂酶C产生1，4，5-三磷酸肌醇(inositol1,4,5-triphosphate，IP3)，IP3再用于IP3受体，引起钙离子的释放导致胞内钙离子的升高，钙离子作为广泛存在的一种第二信使，参与多种生理活动，免疫细胞中胞内钙离子的升高可以影响肌动蛋白的聚合进而影响对病原菌的吞噬，影响吞噬小体和溶酶体的融合，影响活性氧的产生等多种生理功能，进而影响免疫细胞对病原菌的杀伤。对于钙离子信号参与免疫细胞吞噬过程的分子机制研究，会给抗感染药物的研究提供新的理论基础和方向。

目前，已有研究发现IP3R-C端胞内段对于IP3R离子通道的活性发挥重要作用。(Taylor,C.W.,da FonSeca,P.C.,and Morris,E.P.(2004).IP(3)receptors:the searchfor structure.Trends Biochem.Sci.29,210–219.Uchida,K.,Miyauchi,H.,Furuichi,T.,Michikawa,T.,and Mikoshiba,K.(2003).Critical regions for activation gatingof the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor.J.Biol.Chem.278,16551–16560.)

人Sec5蛋白是外包囊复合物的组分，由924个氨基酸长度的ORF(开放阅读框)编码，分子量约一百多个KDa，等电点约为7.0左右，在其氨基端处含有一21个氨基酸区域，形成一个卷曲螺旋域。Sec5蛋白存在与哺乳动物的各组组织，例如脑、肺及肾中。

TAT蛋白是HIV编码的一个调控蛋白，HIV侵染细胞的早期即表达出该蛋白，细胞内TAT参与HIV转染激活，促进HIV复制。TAT蛋白的基因包含2个外显子和一个含有2334个核苷酸的内含子组成。在HIV-1的各亚型中，TAT蛋白的氨基酸组成有所不同。TAT蛋白中具有穿膜功能的序列是位于47～57的11个氨基酸(YGRKKRRQRRR)，富含碱性氨基酸(8个)，被称为蛋白转导域(PTD)。

发明内容