[发明专利]具有对人C‑MET受体酪氨酸激酶的亲和性的泪脂质运载蛋白的突变蛋白及其获得方法

权利要求书

1.一种人泪脂质运载蛋白的突变蛋白或其片段，该突变蛋白或其片段具有对人Met受体酪氨酸激酶或其结构域或片段的200nM或更低的K_D的结合亲和性，其中所述突变蛋白或片段包含相应于如SEQ ID NO:36所示的成熟的人泪脂质运载蛋白的氨基酸序列的至少8个氨基酸置换，所述氨基酸置换选自由以下组成的组：Arg 26→Thr、Val、Pro、Ser、Gly；Glu 27→Gln、Gly、Val、Ser；Phe 28→Met、Asp；Pro 29→Leu、Ile、Ala、Trp；Glu 30→Leu、Gly、Arg、Phe；Met 31→Ser；Asn 32→Leu、Arg、Val、Gln；Leu 33→Tyr、Val、Ile、Thr、Phe；Glu 34→Val、Arg、Ala；Leu 56→Asn；Ile 57→Gln；Ser 58→Ile、Val；Asp 80→Tyr；Lys 83→Ala；Glu 104→Asp；Leu 105→Thr；His 106→Trp；和Lys 108→Gly。

2.根据权利要求1所述的突变蛋白或其片段，其中所述突变蛋白或片段另外包含选自Cys 61→Ser、Cys 101→Ser和Cys l53→Ser的至少一个氨基酸置换。

3.根据权利要求1所述的突变蛋白或片段，其中所述突变蛋白或片段包含选自Arg 111→Pro和Lys 114→Trp的至少一个另外的氨基酸置换。

4.根据权利要求1所述的突变蛋白或片段，其中所述突变蛋白或片段在其N-末端或其C-末端可操作地融合于酶、蛋白或蛋白结构域、肽、信号序列和/或亲和性标签。

5.根据权利要求1所述的突变蛋白或片段，其中所述突变蛋白或片段轭合于选自由以下组成的组的轭合配偶体：有机药物分子、酶标记物、毒素、细胞抑制剂、能够被光激活的和适合光动力学疗法的标记物、药学上合适的放射活性标记物、半抗原、地高辛、生物素、化疗金属配合物或金属、胶体金和延长所述突变蛋白的血清半衰期的部分。

6.根据权利要求5所述的突变蛋白或片段，其中所述延长血清半衰期的部分选自由以下组成的组：聚亚烷基二醇分子、羟乙基淀粉、棕榈酸或其它脂肪酸分子、免疫球蛋白的Fc部分、免疫球蛋白的CH3结构域、免疫球蛋白的CH4结构域、白蛋白或白蛋白片段、白蛋白结合肽、白蛋白结合蛋白和运铁蛋白。

7.根据权利要求6所述的突变蛋白或片段，其中所述白蛋白结合蛋白是细菌白蛋白结合蛋白、针对白蛋白的抗体或抗体片段，或者具有白蛋白结合活性的脂质运载蛋白突变蛋白。

8.根据权利要求7所述的突变蛋白或片段，其中所述细菌白蛋白结构域是链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域。

9.根据权利要求6所述的突变蛋白或片段，其中所述白蛋白结合肽具有式Cys-Xaa₁-Xaa₂-Xaa₃-Xaa₄-Cys，其中Xaa₁是Asp、Asn、Ser、Thr或Trp；Xaa₂是Asn、Gln、His、He、Leu或Lys；Xaa₃是Ala、Asp、Phe、Trp或Tyr；且Xaa₄是Asp、Gly、Leu、Phe、Ser或Thr。

10.根据权利要求6所述的突变蛋白或片段，其中所述聚亚烷基二醇是聚乙二醇(PEG)或其活化衍生物。

11.根据权利要求1所述的突变蛋白或片段，其中所述非天然配体是人Met受体酪氨酸激酶的胞外区或结构域。

12.根据权利要求5所述的突变蛋白或片段，其中所述毒素选自由以下组成的组：百日咳毒素、白喉毒素、蓖麻毒蛋白、皂草素、假单胞菌外毒素、刺孢霉素或其衍生物、紫杉醇类化合物、美登木素类化合物、tubulysin和多拉司他汀类似物。

13.根据权利要求12所述的突变蛋白或片段，其中所述多拉司他汀类似物选自由以下组成的组：奥瑞司他汀E、单甲基奥瑞司他汀E、奥瑞司他汀PYE和奥瑞司他汀PHE。