[发明专利]一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种重组丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，本发明通过构建丙型肝炎病毒蛋白Core,E1和E2的全长及截短突变体表达载体和融合上述三种病毒蛋白的强免疫原性区域的融合抗原HCV_les表达载体，以及通过烟草宿主表达相应的各个蛋白，发现与Core,E1和E2的全长及其截短突变体蛋白相比，融合抗原蛋白HCV_les在诱导中和抗体，与丙型肝炎病毒感染者血清反应性和病毒抑制能力上都得到了显著增强，且表现出了协同增效作用，表明该丙型肝炎病毒融合抗原具有作为丙型肝炎病毒疫苗或诊断试剂的良好前景，可以为丙型肝炎病毒疫苗或诊断试剂的制备提供新的解决方案。

技术领域

本发明属于基因工程疫苗技术领域，具体涉及一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白、基于该丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的丙型肝炎病毒基因工程疫苗及其制备方法与用途。

背景技术

丙型肝炎病毒是丙型肝炎的致病因子，该病毒感染的世界总人数超过1.7亿，我国感染人数超过4000万。大多数丙型肝炎病毒感染者为持续性感染，进而引起慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。据报道，全球40％的慢性肝病和80％的肝细胞癌与丙型肝炎病毒有关，每年全球用于丙型肝炎治疗费用超过1000亿美元。现有的治疗药物只对部分丙型肝炎肝病毒感染者有效，且治疗时间长，成本高和有副作用。疫苗是防治，特别是预防病毒性疾病的一种极其经济、简单和有效的手段。近年来，针对丙型肝炎病毒的疫苗包括灭活疫苗，重组蛋白疫苗，DNA疫苗，融合抗原疫苗等研制工作虽然取得了一些进展。但是，迄今为止，尚没有一种疫苗已经完成临床试验，并能够应用于人类的丙型肝炎预防和治疗(Abdelwahab andAhmed,2016)。

丙型肝炎病毒基因组具有高变异性，采取多种方式逃避宿主免疫反应。自愈的丙肝患者和黑猩猩在急性期可检测到高滴度的多种中和抗体、强烈而广泛的T细胞免疫应答。而进入到慢性期的丙肝感染者和黑猩猩则产生中和抗体较晚、细胞免疫应答微弱且特异性过于集中。因此，成功的丙型肝炎病毒疫苗应该诱导产生高滴度的多种中和抗体和强烈而广泛的T细胞免疫应答(Torresi et al.,2011)。基因工程融合抗原疫苗同时携带多个抗原表位，一方面可以避免传统的灭活或减毒疫苗存在的生物危害性和毒力返祖等问题,另一方面因为也可以诱导产生多种中和抗体应答、以及广泛的细胞免疫应答。因此，重组基因工程融合抗原疫苗成为获得成功的丙型肝炎病毒病毒疫苗的一个热点和发展方向。

现有技术中尚没有临床可用的丙肝疫苗，本专利提供了一种新的植物生产的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，该融合抗原蛋白具有较强的中和抗体诱导能力，与丙肝病人血清有广泛反应性，体外可抑制丙型肝炎病毒感染，为丙肝疫苗或诊断试剂盒提供了新的解决方案。

与本发明有关的背景技术如下文献所示：

Abdelwahab,K.S.and Ahmed,S.Z.(2016)Status of hepatitis C virusvaccination:Recent update.World J Gastroenterol 22(2),862-73.

Baulcombe,D.C.,Chapman,S.and Santa,C.S.(1995)Jellyfish greenfluorescent protein as a reporter for virus infections.Plant J 7(6),1045-53.