[发明专利]一种柠檬的组培快繁方法

说明书

本发明公开一种柠檬的组培快繁方法，包括：(1)启动培养：切取柠檬枝条带芽茎段作为外植体，灭菌处理后接种到启动培养基中，培养4—5周，直至所述外植体上萌发出腋芽并生长至一定长度；(2)增殖培养：切取步骤(1)所述腋芽，接种到增殖培养基中，培养4—6周，直至所述腋芽基部形成丛生芽并生长至一定长度；(3)生根培养：将步骤(2)所述丛生芽切成单芽，将所述单芽接种到生根培养基中，培养4—5周，直至生根且根长至一定长度，即得柠檬组培苗。所述方法得到的幼苗培养时间短，与传统嫁接、扦插相比，能明显提高柠檬的增殖系数，提高成活率，同时保证了其遗传稳定性，便于后期统一的移栽和种植管理，实现柠檬的快速繁殖。

技术领域

本发明涉及植物组培快繁方法，具体涉及一种柠檬的组培快繁方法。

背景技术

柠檬，芸香科柑橘属植物，柠檬又称柠果、洋柠檬、益母果等。枝少刺或近于无刺，嫩叶及花芽暗紫红色，叶片厚纸质，卵形或椭圆形。单花腋生或少花簇生。果椭圆形或卵形，果皮厚，通常粗糙，果汁酸至甚酸，种子小，卵形，端尖；种皮平滑，子叶乳白色，通常单或兼有多胚。花期4—5月，果期9—11月。柠檬是重要的天然香料、食品和工业原料，在食品、医药、化妆品、日用化工等行业均有应用。现有的柠檬栽培方式一般是扦插或嫁接，其繁殖系数较低，生长较慢，成活率较低，此外，也不利于其遗传稳定性的保持。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种柠檬的组培快繁方法，所述方法得到的幼苗培养时间短，与传统嫁接、扦插相比，能明显提高柠檬的增殖系数，提高成活率，同时保证了其遗传稳定性，便于后期统一的移栽和种植管理，实现柠檬的快速繁殖。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种柠檬的组培快繁方法，所述组培快繁方法包括以下步骤：

(1)启动培养：切取柠檬枝条带芽茎段作为外植体，灭菌处理后接种到启动培养基中，培养4—5周，直至所述外植体上萌发出腋芽并生长至一定长度；

(2)增殖培养：切取步骤(1)所述腋芽，接种到增殖培养基中，培养4—6周，直至所述腋芽基部形成丛生芽并生长至一定长度；

(3)生根培养：将步骤(2)所述丛生芽切成单芽，将所述单芽接种到生根培养基中，培养4—5周，直至生根且根长至一定长度，即得柠檬组培苗。

其中升汞处理的处理的时间根据外植体的幼嫩程度确定。

其中，步骤(1)腋芽生长至1—4cm；步骤(2)丛生芽生长至2—5cm；步骤(3)根长至2—5cm。

优选的，步骤(1)所述外植体的灭菌处理为：将所述外植体用消毒液与吐温20的组合物清洗并冲洗干净后，在超净工作台上，先用75％酒精处理20—40s，无菌水清洗3—4次，再用0.1％的升汞处理8—12min，无菌水冲洗5—6次，晾干即可。

优选的，步骤(1)所述启动培养基的组成包括：MS基本培养基，补充5.5g/L琼脂、25g/L蔗糖。

更为优选的，步骤(1)所述启动培养基的组成还包括：补充0.5—2.0mg/L 6-BA、0.1—1.0mg/L KT、0.1—1.0mg/L NAA。

更为优选的，补充1.0mg/L 6-BA、0.2mg/L KT、0.2mg/L NAA。

优选的，步骤(2)所述增殖培养基的组成包括：MS基本培养基，补充0.5—2.0mg/LKT、5.5g/L琼脂、30g/L蔗糖。

更为优选的，步骤(2)所述增殖培养基的组成包括：MS基本培养基，补充1.0mg/LKT、5.5g/L琼脂、30g/L蔗糖。

更为优选的，步骤(2)所述增殖培养基的组成还包括补充0.1—0.5mg/L NAA。

更为优选的，步骤(2)所述增殖培养基的组成还包括补充0.2mg/L NAA。