[发明专利]一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚环酸醚类化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵物提取技术领域，具体地，涉及一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

目前在临床治疗中发现病原微生物的耐药性越来越强，尤其是耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌（MRSA）、铜绿假单胞菌（俗称绿脓杆菌）和白色假丝酵母（俗称白色念珠菌）造成的感染越来越严重，很多传统抗生素已基本丧失疗效，因此有必要寻找新型的抗生素来应对此挑战。此外，在农业生产因为过度使用各种化学合成农药，造成严重的食品、土壤及水污染，并经过食物链危及人体健康和生态平衡，农药残留也严重阻碍了我国的农产品出口；而生物农药具有不易产生抗药性、对非靶生物安全、环境友好且易于自然降解等优点，对于人类健康、环境保护及农业可持续发展具有重要的意义。海洋真菌来源的抗生素及杀虫剂具有易于大规模发酵生产、高效、易于克服抗药性等优点，易于实现药源稳定供给，具有较好的经济、社会与环境效益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有抗生素及杀虫剂的缺陷和不足，提供一种提取自海洋真菌爪曲霉的溴代缩酚酸环醚类化合物，该化合物具有抗真菌、抗细菌活性和杀虫活性，在制备抗真菌剂、抗细菌剂及农用杀虫剂中具有广泛的应用前景。

本发明的目的是提供一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物。

本发明的另一目的是提供上述化合物的制备方法。

本发明的再一目的是提供上述化合物的应用。

本发明的上述目的是用过以下技术方案给予实现的。

本发明采用的海洋真菌爪曲霉（Aspergillus unguis）CGMCC No.3372菌种，于2009年10月28日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC No.3372，株号为DLEP2008001。

一种海洋真菌爪曲霉（Aspergillus unguis）溴代缩酚酸环醚类化学物，其特征在于，所述化学物的化学结构式如（）所示：

（）

上述海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化学物的制备方法包括如下步骤：

S1. 发酵：将爪曲霉DLEP2008001接种于真菌培养基中静置发酵后，分别收集菌丝体和发酵液；；

S2. 粗提：将步骤S1的发酵液经乙酸乙酯萃取后浓缩，菌丝体经有机溶剂提取后浓缩，合并后得粗提物；

S3. 分离纯化：将步骤S2的粗提物进行硅胶柱梯度层析，经硅胶薄层层析检测，将含有目标物质的洗脱组分继续进行硅胶柱、凝胶柱层析和正相制备液相色谱分离纯化得到目标化合物；

其中，步骤S1所述真菌液体培养基的配方为：每升中含有如下组分：土豆汁400～600 mL，NaBr 15～25g，蔗糖15～25g，纯水或自来水400～600 mL。

优选地，所述真菌液体培养基的配方为：每升中含有如下组分：土豆汁500 mL，NaBr 20 g，蔗糖20 g，纯水或自来水500 mL。

具体地，上述海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化学物的制备方法包括如下步骤：

S1. 发酵：将爪曲霉（Aspergillus unguis）CGMCC No.3372接种于真菌液体培养基中静置发酵，发酵2～4天后，加入终浓度为0.5～2 mM（优选1mM）的普鲁卡因溶液，继续发酵18～22天，过滤，分别收集菌丝体和发酵液；

S2. 粗提：将步骤S1获得的发酵液经乙酸乙酯萃取并浓缩，将步骤S1获得的菌丝体用有机溶剂提取并浓缩，将所得浓缩物合并，即为粗提物；

其中，所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一种或几种；

S3. 分离纯化：a. 将步骤S2获得的粗提物经硅胶柱层析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿进行预洗脱，继而用氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，收集以洗脱液体积比100:0～100:1梯度的洗脱的组分；组分特征为硅胶薄层层析板上展开剂为体积比15:1的氯仿-甲醇溶液展开下，比移值为0.29～0.74的混合物组分；

b. 将步骤a收集的洗脱组分再进行硅胶柱层析，洗脱液为体积比5:1的石油醚-丙酮；

c. 将步骤b收集的洗脱组分进行葡聚糖凝胶柱层析，洗脱液为甲醇，流速0.5～0.7 mL/min；