[发明专利]细胞‑生物支架复合体及其3D打印成形方法

权利要求书

1.细胞-生物支架复合体，其特征在于，包括生物支架和设置于生物支架上的细胞-生物凝胶混悬液。

2.根据权利要求1所述的细胞-生物支架复合体，其特征在于，所述生物支架包括生物高分子材料、天然生物材料和无机材料的一种或多种的组合，生物高分子材料包括磷酸钙、聚己内酯、聚四氟乙烯和乳酸-羟基乙酸共聚物的一种或多种的组合，天然生物材料包括明胶和海藻酸钠中一种或两种的组合，无机材料包括硫酸钙、硼硅酸和纳米羟基磷灰石的一种或多种的组合。

3.根据权利要求1所述的细胞-生物支架复合体，其特征在于，所述细胞-生物凝胶混悬液包括细胞和生物凝胶液，细胞为成骨细胞或角膜基质细胞，且生物凝胶液包括重量份为12-16份的冰醋酸、20-25份的壳聚糖、10-15份的氢氧化钠和8-12份的三乙醇胺。

4.细胞-生物支架复合体的3D打印成形方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将生物支架的制备原料混合均匀，用生物打印机的支架打印喷头将混合均匀的生物支架的制备原料逐层加工为与组织器官的实际缺损状况相似的生物支架；

S2：将壳聚糖粉碎，然后将其浸泡于冰醋酸中70-80h，每5-8h充分振荡一次，接着以11000-13000rpm/min的速度离心，取上清液；将氢氧化钠加入上清液中，调节其PH值为6.5-7.5，然后再次以11000-13000rpm/min的速度离心，去除上清液，接着加入冰醋酸和三乙醇胺，混合均匀后，制得生物凝胶液；

S3：用冰醋酸将生物凝胶液稀释到所需蛋白浓度，然后加入氢氧化钠，调节其PH值为8-8.7，接着将重量份为30-35份的培养液和25-30份的血清加入调制后的生物凝胶液中，混合均匀后，得到预凝生物凝胶液，然后将预凝生物凝胶液和细胞放入离心管中，用滴管吹打充分混匀，制得细胞-生物凝胶混悬液；

S4：将细胞-生物凝胶混悬液用生物打印机的细胞打印喷头喷射在生物支架上，然后将生物支架置入培养皿中，接着向培养皿中加入所需培养液，再将培养皿放入旋转式三维培养器内培养，两天换液一次，培养十天后，制得细胞-生物支架复合体。

5.根据权利要求4所述的细胞-生物支架复合体的3D打印成形方法，其特征在于，所述S2中，将壳聚糖粉碎，然后将其浸泡于冰醋酸中72-78h，每6-7h充分振荡一次，接着以11500-12500rpm/min的速度离心，取上清液；将氢氧化钠加入上清液中，调节其PH值为6.7-7.3，然后再次以11500-12500rpm/min的速度离心，去除上清液，接着加入冰醋酸和三乙醇胺，混合均匀后，制得生物凝胶液。

6.根据权利要求4所述的细胞-生物支架复合体的3D打印成形方法，其特征在于，所述S3中，用冰醋酸将生物凝胶液稀释到所需蛋白浓度，然后加入氢氧化钠，调节其PH值为8.2-8.5，接着将重量份为31-34份的培养液和26-28份的血清加入调制后的生物凝胶液中，混合均匀后，得到预凝生物凝胶液，然后将预凝生物凝胶液和细胞放入离心管中，用滴管吹打充分混匀，制得细胞-生物凝胶混悬液。