[发明专利]灰盖鬼伞来源的过氧化物酶的突变体及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一种灰盖鬼伞来源的过氧化物酶的突变体及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，命名为CiP‑G175F蛋白，如序列表的序列1所示。本发明还保护CiP‑G175F蛋白作为过氧化物酶的应用。本发明提供的过氧化物酶，发挥功能的单元为单一蛋白质，更加适用于工业化大规模生产。本发明提供的过氧化物酶，比活力高、底物亲和度高、底物谱广、性质稳定，可应用于清除废水中酚类物质、降解苯类物质、催化染料脱色、生物传感器、医药领域等多个领域，生产不受地域和气候限制。本发明具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种灰盖鬼伞来源的过氧化物酶的突变体及其编码基因和应用。

背景技术

过氧化物酶是一系列能够氧化芳香胺类、酚类等化合物的氧化剂。过氧化物酶可以参与清除废水中的酚类物质，降解苯类物质，催化染料脱色，可用作清洁剂等，在纸浆造纸工业中极具应用潜力。过氧化物酶还可用于食品行业、煤炭行业、化工行业等多个领域。

现有技术中，过氧化物酶经常用作酶联免疫吸附试验的标记酶，例如辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)。但是，HRP由至少12种不同催化活性的酶组成，且酶的比例随不同的生长周期进行改变。

发明内容

本发明的目的是提供一种灰盖鬼伞来源的过氧化物酶的突变体及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，命名为CiP-G175F蛋白，如序列表的序列1所示。

编码CiP-G175F蛋白的基因(CiP-G175F基因)也属于本发明的保护范围。

所述基因为如下(1)或(2)或(3)：

(1)编码区序列表中序列2所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码过氧化物酶的DNA分子；

(3)与(1)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码过氧化物酶的DNA分子。

上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。

含有CiP-G175F基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系、转基因植物组织或重组菌均属于本发明的保护范围。

所述表达盒中，启动子具体可为AOX1启动子。

所述表达盒中，终止子具体可为AOX1终止子。

所述重组表达载体可为在表达载体中插入所述CiP-G175F基因得到的重组质粒。所述表达载体具体可为pPIC9K载体。

所述重组菌是将所述CiP-G175F基因导入出发菌得到的。所述基因具体可通过以上任一所述重组表达载体导入出发菌。所述出发菌可为毕赤酵母，具体可为毕赤酵母X33。将毕赤酵母作为出发菌表达外源蛋白，具有生物量高、表达量高、生产成本低，产物稳定性好的优点。

本发明还保护CiP-G175F蛋白作为过氧化物酶的应用。所述应用中，底物为ABTS或TMB。所述应用中，反应条件为pH4.5。所述应用中，反应体系为pH4.5、50mM醋酸缓冲溶液。

本发明还保护CiP-G175F蛋白在制备具有过氧化物酶功能的产品中的应用。所述应用中，底物为ABTS或TMB。所述应用中，反应条件为pH4.5。所述应用中，反应体系为pH4.5、50mM醋酸缓冲溶液。

本发明还保护CiP-G175F蛋白的如下应用：对过氧化物酶底物进行氧化反应。所述应用中，底物为ABTS或TMB。所述应用中，反应条件为pH4.5。所述应用中，反应体系为pH4.5、50mM醋酸缓冲溶液。