[发明专利]一种拟南芥管状分子体外诱导培养的方法

权利要求书

1.一种拟南芥管状分子体外诱导培养的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)制备拟南芥愈伤组织；制备方法为：将萌发后10～14天苗龄拟南芥幼苗整株切碎接入愈伤组织诱导培养基中，23～25℃暗培养，14～16天继代一次，共诱导培养28～32天，获得拟南芥愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基是在B5基本培养基中添加20g/L的蔗糖、0.5mg/L的2,4-D，0.05mg/L的6-BA，6～8g/L的琼脂，调节pH为5.8；

(2)在愈伤组织增殖培养基上对拟南芥愈伤组织进行扩繁培养；所述愈伤组织增殖培养基是在MS基本培养基中添加30g/L的蔗糖、1mg/L的2,4-D，6～8g/L的琼脂，调节pH为5.8；所述扩繁培养采用的条件为：23～25℃暗培养，15～20天继代一次，共培养30～40天；

(3)将扩繁后的拟南芥愈伤组织进行悬浮培养，获得分散性良好的拟南芥愈伤组织悬浮培养系；悬浮培养采用的条件为：将扩繁后的拟南芥愈伤组织接种于MS液体培养基中，23～25℃，以180rpm转速进行振荡，暗培养，2～3天继代一次，共培养6～9天；

(4)将拟南芥愈伤组织悬浮培养系采用细胞筛进行过滤，过滤后的单细胞培养系转入拟南芥管状分子体外诱导液体培养基中，进行诱导培养，诱导拟南芥愈伤组织单细胞进行分化，在体外形成管状分子；所述拟南芥管状分子体外诱导液体培养基是在MS基本培养基中添加30g/L的蔗糖、6mg/L的NAA，1mg/L的6-BA，6μM的24-表油菜素内酯，调节pH为5.8。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述拟南芥幼苗的培养方法为：挑选成熟饱满的拟南芥种子，用2％次氯酸钠灭菌20min，无菌水冲洗4次后，播种于MS基本培养基上。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，采用200目的细胞筛进行过滤。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，诱导培养采用的条件为：23～25℃，以180rpm转速进行振荡，暗培养。