[发明专利]人工表达HSP27蛋白在检测β2-肾上腺素受体激动剂类药物残留方面的应用

说明书

本发明属于药物残留检测领域，特别涉及人工表达HSP27蛋白在检测β2‑肾上腺素受体激动剂类药物残留方面的应用。本发明借助分子对接技术，利用表达纯化的HSP27进行ELISA筛选，最终得到的蛋白可特异结合β2‑肾上腺素受体激动剂类药物。结果证明，人工合成的HSP27蛋白可与β2‑肾上腺素受体激动剂类药物有很好的结合。由于β2‑肾上腺素受体激动剂类药物种类较多，且难以得到相对于这一类药物的抗体，本发明适配得到的HSP27蛋白能够很好地规避了这一难题，并且蛋白可进行人工合成方法快速取得，检测成本也非常低廉。本发明的人工合成蛋白产量高，且纯化效果良好，与药物的特异性结合较高。

技术领域

本发明属于药物残留检测领域，特别涉及人工表达HSP27蛋白在检测β2-肾上腺素受体激动剂类药物残留方面的应用。

背景技术

β2-肾上腺素受体激动剂，又称为β2-兴奋剂，是一类苯乙胺类化学合成衍生物，通常以盐酸盐等形式保存，常见的包括盐酸克仑特罗、溴布特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸马布特罗等。由于β2-肾上腺素受体激动剂能够促动物肌肉组织增长、减少脂肪沉积、改善肉质、提高饲料转化率等，因此上世纪80年代起，作为饲料添加剂广泛应用于畜禽生产中。其提高瘦肉产量的机理是通过肾上腺受体刺激腺苷酸环化酶的合成，从而升高环磷酸腺苷(c AMP)的浓度以增加激素敏感脂酶活性，加快脂肪分解；另外它还可降低血液中Mg²⁺浓度，间接促进肌肉兴奋，抑制蛋白质分解和脂肪合成，进而增加肌肉蛋白合成。人食用含有瘦肉精的猪肉、内脏及其加工产品后会导致中毒，典型症状为：肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、战栗等，严重者可致人死亡。目前β2-肾上腺素受体激动剂的快速检测方法，无论是ELISA法还是金标记试纸条法都是建立在免疫学的基础上，通过抗原与抗体的特异作用而建立。β2-AR(肾上腺素受体)是G蛋白偶联受体(GPCR)超级家族中的一员，作为GPCR的典型已经深入研究其结构功能，调节机制及信号传导等生理作用。G蛋白偶联受体在大肠杆菌、酵母、杆状病毒和哺乳动物等所有的表达系统中都能够表达蛋白，且具有一定的功能活性，但因受体的种类不同和宿主细胞特点的不同而有所差异。

分子对接(Molecular Docking)是研究药物小分子与蛋白质受体大分子之间相互作用的方法，其本质是配体(Ligand)与受体(Receptor)的相互识别，并涉及到分子的空间变化与能量改变，是药物分子设计中的重要方法之一。

热休克蛋白(Heat Shock Proteins，HSP)，又称热应激蛋白(Heat StressProteins，HSP)或应激蛋白(Stress Proteins，SP)，是细胞或生物体在一些应激原，如高温、缺氧、氧化应激、感染、饥饿、创伤、代谢等条件诱导下，高效表达的一组高度保守的蛋白质，广泛分布于各种生物体内。HSP27是分子量在15～30ku之间s HSP亚家族(低分子量热休克蛋白)中的重要一员，主要参与微丝的稳定和细胞因子信号转导，保护细胞免受各种应激因素的损伤等。目前，还没有HSP27能够检测β2-肾上腺素受体激动剂类药物的相关报道。

发明内容

本发明借助分子对接技术，利用人工表达的HSP27蛋白与β2-肾上腺素受体激动剂类药物特异性结合，最终得到一种新的β2-肾上腺素受体激动剂类药物检测方法。人工合成HSP27蛋白，纯化后进行ELISA结合实验，结果证明，人工合成的蛋白与β2-肾上腺素受体激动剂类药物有良好的结合能力，进一步验证了分子对接技术的可行性。借助本发明的蛋白，可应用于对β2-肾上腺素受体激动剂类药物定性和定量的检测。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

人工表达HSP27蛋白在检测β2-肾上腺素受体激动剂类药物残留方面的应用。

所述的人工表达HSP27蛋白可以与β2-肾上腺素受体激动剂类药物特异性结合。