[发明专利]一种剧毒蘑菇的快速检测方法

说明书

提供一种简便快速的剧毒蘑菇鉴定方法，针对最毒的蘑菇类群，包括鹅膏属(Amanita)、盔孢伞属(Galerina)、环柄菇属(Lepiota)及其它含有鹅膏毒肽(Amanitin)的蘑菇，也适用于对鹅膏毒肽纯品的检测。利用鹅膏毒肽与木质素在盐酸的作用下形成一种特征明显的蓝绿色物质的原理，通过显色反应10‑30分钟内对剧毒蘑菇进行快速鉴定。实验结果表明，盐酸浓度在5‑15％时，应用木材(桦木、松木等)可以有效检测鹅膏毒肽，MgCl₂可使显色效果更佳；盐酸浓度在15‑25％时，利用新闻纸可以有效检测鹅膏毒肽，当溶液存在MgCl₂时效果更佳。能快速准确地鉴定出鹅膏属、盔孢伞属、环柄菇属和其它含有鹅膏毒肽(Amanitin)的蘑菇，对预防蘑菇中毒、认清蘑菇中毒原因以及确定治疗方案等具有直接现实意义。

所属领域：

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种剧毒蘑菇的快速检测方法，该方法利用低浓度盐酸和木材(桦木、松木等)或新闻纸反应生成特征明显的蓝绿色产物，在10-30分钟内快速鉴定出含鹅膏毒肽的剧毒蘑菇。

背景技术：

在大型真菌中，鹅膏科(Amanitaceae)特别是鹅膏属(Amanita)蘑菇最为引人注目。鹅膏属蘑菇绝大多数为专性外生菌根菌，在荒山造林及植被修复方面应用前景显著；部分鹅膏是著名的食用菌，有重要的经济价值(杨祝良2005)。必需重视的是，在该属檐托鹅膏组(A.sect.Phalloideae)中，全部物种都含有剧毒毒素，为蘑菇中最毒的类群，造成90％以上的蘑菇中毒死亡案例(Bresinsky 1990；Unluoglu&Tayfur 2003；Roberts et al.2013)。剧毒鹅膏中所含鹅膏环肽(Amanita cyclic peptides)毒性极高，其致死剂量(LD50＝0.1毫克/公斤)极低，一个成熟的鹅膏个体就含有超过成人致死剂量的环肽(Wieland1986)。在世界范围内每年都有逾百起鹅膏中毒及死亡案例，中国也有大量相关报道(Deng etal.2011；Chen et al.2013；Li et al.2014；陈作红2014)。鹅膏环肽主要分为两大类，鹅膏毒肽(Amatoxin)和鬼笔毒肽(Phallotoxin)(Wieland 1975,1979；Faulstich 1979)，在天然产物中这些环肽的结构是独一无二的(May&Perrin 2007)。鹅膏毒肽为真核生物RNA聚合酶II的高效抑制剂，能够阻断mRNA和蛋白质的合成。鬼笔毒肽作用机制为不可逆地结合并绑定细胞骨架中的纤维状肌动蛋白丝(F‐Actin)，破坏其聚合与解聚的动态过程。鹅膏的剧毒来自鹅膏毒肽，是导致死亡的原因，因此检测该毒素就能鉴定这类剧毒蘑菇。除了鹅膏外，盔孢伞(Galerina)、环柄菇(Lepiota)以及锥盖伞(Conocybe)等属的一些蘑菇也含有鹅膏毒肽。目前，世界范围内对剧毒蘑菇的鉴定主要通过薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)和麦氏颜色反应(Meixner test)(Weland 1986,Beuhler et al.2004)。薄层层析检测困难耗时，需要标品且对操作者有较高的要求。高效液相色谱的检测过程繁琐，耗时长且依赖昂贵的设备，易用性最差。麦氏颜色反应操作容易，但需要使用36‐38％的发烟浓盐酸，操作危险，无法在野外及无通风的环境中使用。

目前，现有技术中尚无用低浓度盐酸检测鹅膏毒肽的相关报道，也没有可在安全的盐酸浓度下检测鹅膏毒肽方法的报道。

发明内容：

本发明旨在提供一种可广泛应用的快速检测剧毒蘑菇方法，该方法针对鹅膏毒肽，这些毒素造成90％以上蘑菇中毒死亡案例。本发明利用木材(桦木、松木等)或新闻纸分别在低浓度(5-15％)和中浓度(15-25％)盐酸作用下，与含鹅膏毒肽的剧毒蘑菇快速反应生成特征性的蓝绿色物质的原理。整个检测过程约10-30分钟，能够快速甄别含鹅膏毒肽的剧毒蘑菇，为预防此类蘑菇中毒以及应对蘑菇中毒事件提供了一条快速安全的途径。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：