[发明专利]高茶氨酸茶树资源快速筛选方法

说明书

本发明公开了一种高茶氨酸茶树资源快速筛选的方法。茶树茶氨酸占其氨基酸总量的40%‑70%，高茶氨酸茶树资源其茶氨酸含量大于其干重的2.5%。通过酶标仪利用96孔板筛选茶树氨基酸含量≥3.57%的资源作为候选资源，并利用液相色谱进一步测定其茶氨酸含量来进行快速筛选。本发明具有通量高、快速而准确的优点。

技术领域

本发明涉及生化分析领域，具体涉及一种高茶氨酸茶树资源快速筛选方法。

背景技术

茶氨酸是茶树的特征性氨基酸。在茶叶中茶氨酸的含量是其干重的1％-2％，游离氨基酸的40％-70％。由于茶氨酸具有镇静安神等多项生理功能，因此筛选高茶氨酸茶树资源具有重要应用价值。

目前对茶叶中茶氨酸的检测方法主要有分光光度法，纸层析法、气象色谱法、碱式碳酸铜沉淀法、薄层色谱法、核磁共振法、液相色谱法、氨基酸自动分析仪分析法及毛细管电泳法等，其中后3种是最常用的方法。由于茶氨酸无荧光发射特性，且紫外吸收尚未确定，因此在对其进行检测时通常都需要进行显色或者衍生化处理，从而导致检测样品费时费力。高茶氨酸茶树资源在茶树中的比例特别低，通过大规模群体筛选需要花费很大的人力物力，因此不适合大规模筛选。通过96孔板进行氨基酸含量测定，筛选出候选资源再进一步测定可大大缩短时间。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种高茶氨酸茶树资源快速筛选方法。采用本发明的方法，可以快速、精确的定位高茶氨酸茶树资源。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，步骤如下：

S1.候选资源的筛选：利用96孔板酶标仪法，先筛选出氨基酸含量高的茶树资源，将其作为候选资源；

S2.高茶氨酸茶树资源筛选：利用OPA柱前衍生-HPLC法测定候选资源中茶氨酸含量，根据茶氨酸含量高低来筛选出高茶氨酸茶树资源。

进一步地，所述候选资源的筛选，具体步骤如下：

S11.L-谷氨酸标准曲线的绘制：准确称量谷氨酸配置成母液，并配置成不同浓度梯度的工作液用于绘制L-谷氨酸标准曲线；

S12.茶汤的制备：将茶叶研磨成茶粉，准确称量0.1g样品于10ml的离心管中，用移液管加入10ml的100℃水，混匀后置于100℃水浴锅中加热45min，每隔10min混匀一次；冷却至室温，低速离心后用1ml移液器抽取上清过0.22um滤膜至2ml EP管中备用；

S13.测定吸光度：取1ml S12中茶汤或S11中L-谷氨酸工作液、0.5ml pH8.0的磷酸缓冲液及茚三酮溶液于2ml的EP管中混匀，置于100℃水浴锅中加热15min，期间每隔3min混匀一次；冷却后，取20ul反应液于96孔酶标板上，并加入230ul水，利用酶标仪测吸光值；

S14.氨基酸含量的计算：根据茶汤氨基酸的吸光度，对照L-谷氨酸标准曲线推算出氨基酸含量，选出氨基酸含量高的资源即可。

进一步地，所述候选资源中茶树氨基酸含量≥3.57％。

进一步地，所述茶叶为春季采摘一芽二叶茶树品种。

进一步地，所述L-谷氨酸标准溶液浓度分别为：0.1mg/ml、0.12mg/ml、0.2mg/ml、0.25mg/ml、0.3mg/ml、0.35mg/ml、0.4mg/ml、0.45mg/ml、0.5mg/ml。

进一步地，所述高茶氨酸茶树资源筛选，步骤还包括茶氨酸标准曲线的绘制。

进一步地，所述茶氨酸标准曲线的绘制，具体步骤为准确称取0.1g茶氨酸配置成母液，然后配置成不同浓度的工作液用于绘制标准曲线。